CXCLl6SR—PSOX基因克隆和原核表达.PDFVIP

·142· 塞旦捡墼匡盟苤查2Q!!生!旦筮3鲞筮≥塑垡hi!!塑』!!望堂垡￡!迥!!!￡!!hQ!!g迪，S!P!!坐b丛2Q!!，y!!：3，盟!：! CXCLl 6／SR—PSOX基因克隆与原核表达 李丹 陈兴明 许丽艳 易勇 刘春雷 肖敏 敬华 作者单位：100101北京市，解放军第306医院检验科 【摘要】 目的构建GST—CXCLl6／SR—PSOX融合蛋白原核表达载体并进行原核表达及鉴定。方 法从人外周血单个核细胞中提取总mRNA，反转录得到eDNA后PCR扩增获得CXCLl6／SR—PSOX 基因全长，构建融合表达载体pGST—CXCLl6／SR—PSOX，通过酶切、测序及诱导表达后的免疫印迹实验 验证重组载体构建的正确性及融合蛋白表达的正确性。结果PCR扩增获得预期长度的DNA片段 (822bp)，克隆至pGEX一6p一1载体后测序与GeneBank相符。诱导表达获得的蛋白相对分子质量与预期 一致，免疫印迹实验证实为GST融合蛋白。结论GST—CXCLl6／SR—PSOX融合蛋白表达载体构建成 功，原核表达顺利。 【关键词】GST；融合蛋白；CXCLl6／SR—PSOX；原核表达 The ofhumanCXCLl6，sR—PSoXfusion andits cloning protein prokaryoticexpression LI ofClinical 306th Dan，CHEN Laboratory，the Xing-ming，XULi-yan，eta1．Department Hospital，Beijing 100101，China Toconstructa vectorofGST-CxCLl6／SR—PS0xand 【Abstract】Objective prokaryoticexpression thefusion was andidentified．MethodsThetotalmRNAwasextractedfrom proteinexpressed peripheral full bloodmononuclearcell，andreverse chainreactionwas to the transcriptionpolymerase performedamplify ofCXCLl6／SR—PSOX wasconstructed theCXCLl6／ len殍h gene．ThepGST-CXCLl6／SR-PSOXbyligasing SR—PSOXand correctnessofrecombinantwasverified incisionand gene pGEX一6D一1．The plasmid byenzyme thecorrectnessof wasverified andwesternblot．ResultsA sequencing，and expression byelectrophoresis DNA thenclonedinto ofse- PCR，and homology specificfragment(822bp)wasamplifiedby pGEX-6p-1．The GeneBank．Themolecularmassofindu