黄独微型块茎诱导形成中sqs基因表达的qrt-天津中草药杂志社.pdf

• 1520 • 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 10 期 2015 年 5 月 黄独微型块茎诱导形成中 SQS 基因表达的 qRT-PCR 分析 * 尹明华，洪森荣 ，林国卫，王爱斌，柯维忠 上饶师范学院生命科学学院，江西 上饶 334001 摘 要：目的 对黄独微型块茎鲨烯合酶（SQS ）基因的表达量进行分析，旨在为阐明黄独微型块茎不同诱导形成时 期皂苷的合成机制提供理论依据。方法 以Actin 基因为内参基因，采用实时荧光定量 PCR （qRT-PCR ）分析技术。 通过对不同诱导形成时期的黄独微型块茎进行取样并提取 RNA ，反转录获得 cDNA 作模板，利用 sybr Green I 成功构 建了目的基因 SQS 和 Actin 的扩增曲线和熔解曲线。结果 定量结果表明，SQS 基因在黄独微型块茎诱导形成的初期 （第18～36 天）。表达量显著增加；在黄独微型块茎诱导形成的中期（第 36～72 天）SQS 基因的表达量显著下降，并 趋于稳定；在黄独微型块茎诱导形成的后期（第 72～90 天）SQS 基因的表达量再次显著下降。结论 在黄独微型块茎 诱导形成的过程中，SQS 基因的表达量呈现出“低-高-低-不变-低”的变化趋势，推测 SQS 是黄独微型块茎诱导形成中 皂苷生物合成的关键酶。 关键词：黄独；微型块茎诱导形成；鲨烯合酶 SQS 基因；actin 基因；qRT-PCR 中图分类号：S632.1 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)10 - 1520 - 05 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.10.021 qRT-PCR analysis of SQS gene expression during microtuber formation of Dioscorea bulbifera YIN Ming-hua, HONG Sen-rong, LIN Guo-wei, WANG Ai-bin, KE Wei-zhong College of Life Sciences, Shangrao Normal University, Shangrao 334001, China Abstract: Objective In order to provide a theoretical basis for clarifying the mechanism of synthesis of saponins during different induction formation period of Dioscorea bulbifera microtubers, squalene synthase (SQS) gene expression of D. bulbifera microtubers was analyzed in this paper. Methods Using Actin gene as a reference gene, Real-time quantitative PCR (qRT-PCR) analysis technology was applied. The amplification curve and solubility curve of SQS (target gene) and Actin (reference gene) were successfully constructed by SYBR Green I after RNA was extracted from different formation period of D . bulbifera microtuber and cDNA was obtained by reverse transcription. Result Quantitative results showed that: During the initial stage