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仿刺参apostichopusjaponicus水溶性海参皂苷的分离纯化及其药理活性研究水产养殖专业论文
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仿剌参(Apostichopusjaponicus)水溶性海参皂苷的分离纯化及其药理活性研究
仿剌参(Apostichopusjaponicus)水溶性海参皂苷的分离
纯化及其药理活性研究
摘要
皂苷(或皂甙)广泛存在于部分陆生植物和海洋棘皮动物海参和海星中, 具有溶血、抗肿瘤、抗真菌、细胞毒、免疫调节、抑制Na+.10.ATP酶等多 种生理和药理学活性。海参体内富含的海参皂苷,是一类主要的次生代谢产 物。目前,对海参皂苷的分离制各主要采用乙醇或甲醇等有机溶剂萃取法,但 这类方法不仅有机溶剂使用量大、成本高、易污染环境、不适于工业化生产, 而且所得海参皂苷制品的水溶性较差,限制了海参皂苷在医学I临床上的应用途 径和应用范围。遗憾的是,至今还未见到有关水溶性海参皂苷分离纯化及 生物活性的研究报道。为此,本文以仿刺参(Apostichopusjaponicus)为材
料建立了其水溶性海参皂苷的提取方法,利用各种层析技术对水溶性海参皂 苷进行了分离纯化,并对各种皂苷制品的抗菌活性进行了研究,利用体外培 养的肿瘤细胞进行了抗肿瘤活性研究,并进行了抗氧化和驱蝇活性研究, 旨在筛选出具有强抗真菌和抗肿瘤活性的水溶性海参皂苷纯化样品。为利用水 溶性海参皂苷研制高效抗真菌、抗肿瘤及驱蝇药物创造条件。
利用正交实验对从冻干仿刺参加工废弃液中制备水溶性海参皂苷的 技术工艺进行了优化,结果显示,从冻干仿刺参废弃液中分离制备水溶性 海参皂苷的最佳技术工艺条件为:仿刺参废弃液pH值为10,AB.8大孔
树脂桂的上样速率为2倍柱体积(BY)/h、洗脱用乙醇浓度为70%、洗
脱体积为6 BV。该技术工艺具有操作简单、有机溶剂使用量少、适合于 工业化生产等诸多特点,不仅可用于水溶性海参皂苷的大规模制备和生 产,而且还充分利用了冻干仿刺参加工废弃液,有效避免了因该废弃液 排放所造成的环境污染问题。
从冻干仿刺参废弃液中分离制备出的水溶性海参皂苷属于三萜皂
苷;抑菌结果表明,水溶性海参皂苷对裂殖酵母(Schizosaccharomyces
皇曼堡鲎盔兰量主翌圣兰兰垄笙兰pombe)、酵母菌啤酒酵母(Saccharomyes
皇曼堡鲎盔兰量主翌圣兰兰垄笙兰
pombe)、酵母菌啤酒酵母(Saccharomyes cerev妇iae)、白色念珠菌(Candida albicans)、葡萄炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、黄瓜桔萎病原 菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)和霉菌黑曲霉似spergillus niger)
均具有显著的抑菌活性,其最低抑菌浓度MIC值分别为O.002、O.016、 o.063、o.063、0.125和o.250mg/mL,而对枯草芽胞j千宣(Bacillussubtilis)、 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Eschetichia cold 和绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)均没有抑制作用;所得皂苷对体
外培养的HeLa富颈癌细胞、A-549肺癌细胞、SGC一7901胃癌细胞和 8el-7402肝癌细胞均具有显著的增殖抑制活性,IC50值分别为16.39、
13.98、14.5l和15.29肛g/mL;浓度为20 mg/mL的皂苷在24 h内具有显
著的驱蝇活性;所得皂苷没有明显的抗氧化活性。 将所得水溶性海参皂苷再次上样于AB.8大孔树脂柱,分别利用30%、
50%、70%、80%和95%进行洗脱,发现70%、80%和95%乙醇溶液洗脱 组分不仅对6种真菌具有显著的抗真菌活性,而且对体外培养的4种癌 细胞也均具有显著的抗肿瘤活性。
所得具有显著抗真菌活性和抗肿瘤活性的70%乙醇溶液洗脱组分, 经硅胶柱层析和Sephadex LH.20柱层析进一步纯化后,获得了4种水溶 性海参皂苷单体组分SCl~4,其中SC.2、SC.3和SC.4的纯度分别为 99.6%、99.8%和96.2%;SC.2和SC.3具有极强的抗真菌和抗肿瘤活性, 它们对裂
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