配子与胚胎生物技术卵母细胞与胚胎保存.PPTVIP

四. 外源基因的导入 显微注射法 胚胎干细胞介导法 逆转录病毒感染法 精子载体法 细胞核移植法 五. 动物转基因技术目前存在的主要问题 转基因动物成功率低， 造成宿主基因突变， 外源基因表达水平不高， 逆转录病毒可能从整合位点脱落，恢复病毒特性， 基因污染等安全性问题等。 六、 哺乳动物转基因技术的发展趋势 1.提高转基因动物的生产效率： 2.加强基因整合技术研究： 3.转基因技术将在医学、基础生物学和农业中发挥巨 大作用 第六节 显微受精技术 一、显微受精的基本方法 1.固定针和注射针的准备 2.卵子的采集与准备 3.精子准备 4.精子细胞内显微注射 5.ICSI胚的化学激活 6.ICSI胚体外培养 二、影响显微受精的因素 1.卵龄： 2.PVP浓度： 3.ICSI前精子处理： 4.ICSI后激活处理： 5.第一极体位置： 6.电脉冲仪的应用： 三、显微受精技术的应用前景 1.提高珍稀品种的种公畜个体和性控分离精子的利用率 2.用于治疗雄性不育 3.透明带硬化卵子的受精 4.用于转基因动物生产 第七节 干细胞研究 哺乳动物胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞） 一般是指从早期胚胎经体外分化抑制培养分离出来的具有全能性的细胞。 一、概述 胚胎干细胞研究的历史： 1、1981年 Evans 和 Kaufman 获得小鼠ES细胞系 2、1988年 Doetschman获得仓鼠ES细胞系 3、1994年 Wheeler 和Robert获得猪ES细胞系 4、1998年 Thomson获得人的ES细胞系 5、2007年 日本的Yamanaka研究小组和美国的James Thomson 研究小组分别获得诱导多能性干细胞（induced pluripotent stem cell，iPS 细胞） ES细胞的生物学特性： ES细胞具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小、核大，核仁突出，培养时呈克隆状生长；在功能上，ES细胞具有发育的全能性，即具有分化为成年动物体内任何一种细胞类型的能力。 ES细胞具有细胞系的特征，在饲养层上能维持未分化状态并实现自我更新。因为可无限增殖，也可冷冻保存。 ES细胞的形态 ES细胞的多能性 二、ES细胞分离和鉴定 基本程序 (一)选择抑制细胞分化的培养体系 1、饲养层培养体系 2、条件培养体系 3、培养液中添加分化抑制因子体系 （二）早期胚胎的选择 （三）胚胎干细胞的分离 （四）胚胎干细胞的保持 （五）胚胎干细胞的鉴定 （六）胚胎干细胞的分化潜力验证 ES细胞在哺乳动物个体发生发育规律的研究中极有价值的工具； ES细胞是研究细胞分化的理想手段； ES细胞是研究基因功能的首选细胞； ES细胞作为生产转基因动物的主要途径之一； ES细胞治疗技术将引起一场医学革命； ES细胞可用于研究细胞癌变机理和新药物的筛选。 三、ES细胞的应用 思考题 1.何谓性别控制？其对人类和动物尤其是 家畜的育种和生产有何意义？ 2.简述流式细胞仪分离精子的理论基础与原理 3.简述PCR检测法进行胚胎性别鉴定的原理 及基本过程 4.性别鉴定技术的应用前景如何？ 5.哺乳动物的体外受精技术如何定义和应用前景如何？ 6.细胞体外成熟、体外受精和早期胚胎体外 发育的主要因素各有哪些？ 7.简述ES细胞的生物学特性 精子分离流程示意图 　（二）胚胎的性别鉴定 鉴定移植前胚胎性别是受精后对后代进行性别选择的一种方法。因为在自然条件下，公母的性比例接近50：50，当选择一种性别胚胎时，必然弃掉另一半的性别胚胎。 胚胎性别鉴定的方法有多种，如性染色质鉴定法、染色体组型鉴定法、雄性特异抗原鉴定法、细胞毒性鉴定法、免疫荧光定法和PCR鉴定法等。 （三）胚胎性别鉴定技术的应用前景 AI、ET、IVF和性别控制等四大繁殖新技术的相结合，对畜牧业生产的发展将起到无可估量的作用和产生极其深远的影响。 如将性别控制技术应用于动物克隆和转基因技术之中，毫无疑问，整个生物工程将按照人们的意愿更快更有效的发展和应用。 第四节 动物克隆 一、概述 “克隆”是从英文“clone”音译而来，在生物学领域有 3个不同层次的含义。 在分子水平，克隆一般指DNA克隆（也叫分子克隆）。 在细胞水平，克隆是指由一个单一的共同祖先细胞分裂所形成的一个细胞群体。 在个体水平，克隆是指基因型完全相同的两个或更多的个体组成的一个群体。 比如，两个同卵双胞胎即为一个克隆！ 体细胞克隆： 即取出一个双倍体细胞核移入一个去核的卵细胞，并在一定条件下进行核卵重组，再植入代孕母体中发育成新个体的过程。供体细胞均来自高度分化的体细胞，其种类繁多、数量无限。 由动物体内一个细胞经过无性