三种蛋白水解物对成骨细胞的促增殖和抗凋亡作用食品科学与工程;食品科学专业论文.docxVIP

Classified Classified Index： Code：10224 Confidential(yes／no)：No N0．：121010851 Dissertation for the Master Degree ／n vitro Proliferation and Anti--apoptotic Effects of Three Protein Hydrolysates towards Osteoblasts Candidate：Pan Xiaowen Supervisor：Professor Zhao Xinhuai Degree Category：Master of Engineering College：College of Food Science First level discipline：Food Science and Engineering Second level discipline：Food Science Harbin China June 2015 万方数据 IHi IHi l l U M III III U IIIII Y2771 933 目 录 目 录 摘要 ．．I 英文摘要 ．III 1引言 l 1．1骨质疏松症的研究进展 1 1．1．1骨质疏松症的定义 ．1 1．1．2骨质疏松的危害 ．2 1．1．3骨质疏松的发病机理 ．2 1．1．4骨质疏松症的药物治疗弊端 ．．3 1．2蛋白质的摄入与骨质疏松症的关系 ．3 1．2．1蛋白摄入量和骨密度的关系 ．．4 1．2．2蛋白摄入与骨折的关系 ．4 1．2．3蛋白摄入与骨代谢的关系 ．4 1．3明胶、大豆蛋白和酪蛋白概述 5 1．3．1明胶的特性和应用 ．5 1．3．2大豆蛋白的特性和应用 ．5 1．3．3酪蛋白的特性和应用 ．6 1．3．4明胶水解物的生物活性 ．6 1．3．5大豆蛋白水解物的生物活性 ．．7 1．3．6酪蛋白水解物的生物活性 ．8 1．3．7三种蛋白水解物的骨健康作用的研究进展 9 1．4研究目的和意义 9 1．5研究的主要内容 ．10 2材料与方法 1l 2．1试验材料 11 2．1．1原料与试剂 ．．11 2．1．2主要仪器设备 ．．12 2．2研究技术路线 13 2．3试验方法 13 2．3．1蛋白水解前处理 13 2．3．2木瓜蛋白酶活力的测定 13 2．3．3蛋白水解物的制备 15 2．3。4蛋白水解物的水解度(DH)测定 一15 2．3．5细胞培养 ．．16 2．3．6细胞增殖检测 ．．16 2．3．7细胞周期循环检测 16 2．3．8细胞凋亡检测 ．．16 I 万方数据 东北农业大学工学硕士学位论文2．3．9氨基酸分析 东北农业大学工学硕士学位论文 2．3．9氨基酸分析 ．．17 2．3．10基因芯片及荧光定量RT-PCR分析基因表达变化分析 17 2．3．11 Western．blot分析成骨细胞中蛋白表达变化 ．18 2．4数据统计 ．1 8 3结果与分析 20 3．1蛋白水解物的制备 ．20 3．1．1木瓜蛋白酶活力的测定 20 3．1．2游离氨基含量测定 20 3．1．3蛋白质水解物水解度与时间曲线 21 3．1．4蛋白质水解物的制备及水解度的测定 2l 3．2三种蛋白水解物对人成骨细胞的增殖影响 22 3．2．1光学显微镜观察结果 22 3．2．2 CCK．8法检测结果 ．．22 3．3三种蛋白水解物对人成骨细胞的周期循环的影响 25 3．4三种蛋白水解物对人成骨细胞的凋亡的影响 26 3．4．1依托泊昔和氟化钠IC50测定 26 3。4．2三种蛋白水解物对成骨细胞凋亡的预防作用 ．27 3．4．3三种蛋白水解物对成骨细胞凋亡的逆转作用 ．28 3．5三种蛋白水解物氨基酸组分分析 ．．30 3．6基因芯片检测和荧光定量RT-PCR检测结果 31 3．7 Western—Blot检测结果 32 4讨{仑 ．．34 4．1三种蛋白水解物对成骨细胞增殖的影响 ．．34 4．2三种蛋白水解物对成骨细胞周期的影响 ．．35 4．3三种蛋白水解物对成骨细胞抗凋亡作用 ．．35 4．4三种蛋白水解物促骨健康作用与氨基酸组成的分析 ．．35 4．5明胶水解物作用成骨细胞分子机制 ．36 4．6存在的问题 37 5结{仑 ．．38 致{射 ．．39 参考文献 40 附录A：细胞增殖作用的光镜观察结果 48 附录B：目标基因的荧光定量RT．PCR结果 51 攻读硕士期间发表的学术论文 ．．53 II 万方数据 CobITENTSCONTENTS CobITENTS CONTENTS Abstract ． I Abstract in English ．．III 1 Introduction 1 1．1