瑞氏木霉qm9414在不同碳源条件下动态酶谱及胞外蛋白质组学分析微生物学专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明 的法律责任由本人承担。 论文作者签名： 考牡 日期： ] a O|”j|’ 关于学位论文使用授权的声明 本人同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的印刷件 和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 (必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：际啼“导师签名：芗号私穆日期：◇。肚上，，7 山东大学硕士学位论文目录 山东大学硕士学位论文 目录 摘要 ．I ABSTRACT ．．Ⅳ 缩写词表： ．．VI 第1章绪论 1 1．1植物细胞壁的主要成分与结构 l 1．1．1纤维素的化学组成和结构 ．2 1．1．2半纤维素的化学组成和结构 ．3 1．1．3果胶的化学组成和结构 ．3 1．1．4木素的化学组成和结构 ．4 1．2木质纤维素降解酶系 4 1．2．1纤维素降解酶类 ．4 1．2．2半纤维素降解酶类 ．6 1．2．3果胶降解酶类 ．7 1．2．4辅助蛋白酶系 ．7 1．3微生物降解木质纤维素的研究进展 8 1．3．1细菌木质纤维素降解酶系表达调控及其降解机制 ．8 1．3．2丝状真菌木质纤维素降解酶系的表达调控及其降解机制 15 1．4立题依据 ．20 第2章胞外酶系动态酶谱与产物谱技术的建立与在瑞氏木霉中应用 ．．21 2．1材料与方法 21 2．1．1菌种 ．．21 2．1．2培养基与试剂 2 1 2．1．3仪器与设备 22 2．1．4实验过程与方法 一22 2．2结果与分析 。24 2．2．1还原糖的测定及糖谱分析 24 2．2．2胞外糖苷水解酶的活性测定及Native．PAGE酶谱分析 ．．25 2．3本章小结 ．26 第3章不同碳源分批发酵胞外蛋白酶谱及产物谱动态分析 ．．27 3．1材料与方法 27 3．1．1菌种 ．．27 3．1．2材料与试剂 27 3．1．3仪器与设备 27 3．1．4实验与方法 一27 3．2结果与讨论 ．．28 3．2．1不同碳源还原糖测定及产物谱分析 28 3．2．2主要胞外蛋白质的鉴定 31 3．2．3不同碳源对内切纤维素酶系分泌的影响 32 3．2．4不同碳源对木聚糖酶分泌的影响 37 3．3本章小结 ．40 第4章不同碳源诱导条件下胞外酶系蛋白质鉴定及蛋白质组学分析 ．．4l 4．1材料与方法 ．．41 山东大学硕士学位论文4．1．1菌种 山东大学硕士学位论文 4．1．1菌种 4l 4．1．2材料与试剂 4l 4．1．3仪器与设备 4l 4．1．4实验过程与方法 ．．4l 4．2结果与讨论 ．42 4．2．1不同碳源诱导条件下蛋白质组学的分析 42 4．2．2秸秆麸皮为碳源条件下胞外蛋白分泌时序性分析 46 4．3本章小结 ．5 l 全文总结与展望 ．．52 附件1：不同碳源条件下蛋白质组数据 55 附件2：固体培养48h，72h，96h，120h蛋白质组学分析数据 56 参考文献： ．．57 攻读硕士期间发表的学术论文 ．．63 致谢 64 山东大学硕士学位论文摘要 山东大学硕士学位论文 摘要 随着全球能源消费的日益递增，石油等化石能源持续消耗，人类社会正面临 着能源危机以及日益严峻的环境问题，大力发展生物质能源可望为解决能源短缺 的难题做出贡献。木质纤维素作为可再生的生物质是能够被转化为液体燃料，并 且成本低廉可用性强等特点，被认为是生产生物燃料的理想原料。然而，由于木 质纤维素结构复杂、成分多样，以及其各组成成分(纤维素、半纤维素，以及木 质素)间常交链成复杂的超分子结构，形成了生物质抗降解的屏障，致使无论是 原核的细菌还是真核的丝状真菌，都难以对其进行高效的降解。由于木质纤维素 结构复杂层次性强，其降解所需要的酶的种类也众多，包括纤维素降解酶系，半 纤维素降解酶系，果胶降解酶系以及一些和降解相关的辅助蛋白。瑞氏木霉于 2008年获得全基因组测序，从基因组的分析显示共有200个基因编码糖苷水解 酶，其中有10个基因编码熟悉的纤维素酶(2个外切纤维素酶，5个内切纤维素 酶)，16个基因编码半纤维素酶，103个糖基转移酶。由此可见不仅木质纤维素 的组成复杂，其降解所需的酶也很复杂，要彻底高效的降解木质纤维素，了解真 菌降解过程中各种酶的组合以及分泌的次序性才是关键。因此，本文探究降解酶 系的分泌是否随底物的种类，浓度的不同而发生变化