更年春对β淀粉样蛋白致pc12细胞和大鼠海马细胞损伤的保护作用妇产科学;中西医结合妇科专业论文.docxVIP

复旦大学硕士学位论文—李君“更年春刀对p一淀粉样蛋白致PCI2细胞 复旦大学硕士学位论文—李君 “更年春刀对p一淀粉样蛋白致PCI2细胞 和大鼠海马细胞损伤的保护作用 中文抽腰 围绝经期综合征是指妇女在绝经前后由于卵巢功能衰退所引起的一系列躯 体和精神心理的症状，中医认为围绝经期综合征相当于“绝经前后诸症”，以肾 精气亏损为本。部分患者除了会出现血管舒缩症状、神经精神症状外，绝经中远 期还会出现骨质疏松、学习记忆能力减退甚至阿尔茨海默病(Alzheimer’S disease，AD)。AD是一种以进行性痴呆为主要特征的神经系统退行性疾病，其特 征性病理改变是脑内出现老年斑和神经原纤维缠结，并伴有突触和神经元缺失。 p一淀粉样蛋白(p—amyloid protein，Ap)是构成AD特征性病理改变老年斑核 心的主要物质。 补肾中药“更年春”(GNC)方，以滋肾柔肝清心泻火为治则制成，临床验证 治疗更年期综合征疗效良好，尤其可以改善大脑功能，增强记忆能力。既往实验 发现GNC可能通过提高雌激素受体含量对神经内分泌免疫网络起良性调控作用， GNC可以提高大鼠切除卵巢后Morris水迷宫成绩；GNC可能通过提高海马中ERB mRNA和蛋白的表达、调节海马胆碱能指标而改善学习和记忆能力低下；GNC不引 起子宫内膜增生， 提示中药对改善学习和记忆能力低下有潜在的应用前景。 为进一步证实GNC方的作用，我们采用Ap。。嗡作用于PCI2细胞和大鼠海马 神经细胞，建立AD的细胞模型，并探索GNC含药血清对受损神经细胞的保护作 用及可能的作用机制。 第—部分 搿更年春一对Ap蕊。。致PCI2细胞损伤的保护作用 目的：研究中药“更年春”对AB。。一∞致PCI2细胞损伤的保护作用及可能 的作用机制。 方法：三月龄SD雌性大鼠去势后随机分为两组：一组去势雌性大鼠灌服相 当于成人10倍剂量的中药更年春方颗粒溶液，取血制备大鼠含药血清(MRS)； 另一组去势雌性大鼠灌服相应剂量的生理盐水，取血制备去势大鼠血清(NRS)。 不同浓度MRS和NRS以5％、10％、20％培养PCI2细胞24 h和48 h，CCK一8方法 检测细胞活力，摸索含药血清作用细胞的合适浓度和时间。分别以5U M、lOIJ 复旦大学硕士学位论文—李君M、20p 复旦大学硕士学位论文—李君 M、20p M、50p MAB。。嗡处理PCI2细胞24 h和48 h，CCK-8测定细胞活力， 选择合适浓度以建立阿尔茨海默病细胞模型。设立实验分组为正常组、含药血清 组、NGF组、普通去势大鼠血清组、模型组，加入Ap。淌后培养24 h用于后续 检测。CCK一8法检测各组的细胞活力；Annexin V-FITC／PI双染色流式细胞术检 测PCI2细胞的早期细胞凋亡率；western blotting方法检测各组细胞Bcl一2，Bax 和active caspase一3的蛋白表达水平。 结果l 1)PCI2细胞培养24 h和48 h，同一浓度的MRS组比NRS组有更高的 细胞活力，差异有统计学意义(仄0．01)，且随着血清浓度升高，培养时间延长， 细胞活力有所升高，并在20％的MRS组细胞活力最高。 2)Ap。。．。。使PCI2细胞活力降低，终浓度为5 IJ mol／L(M)、lOp M、209 M、 50p M的Ap衢嗡作用于PCI2细胞，培养24 h_；fI]48 h后，随着Ap。钓。作用浓度的增加， 细胞活力逐渐下降，并与浓度呈负相关性，相邻浓度组的差异有统计学意义 (仄0．01)。 3)与模型组比较， MRS组的细胞活力显著升高(与NGF组相当)，差异有统 计学意义(仄0．01)。 4)与模型组比较，MRS组早期凋亡率显著降低(与NGF组相当)，差异具有统 计学意义(仄0．01)。 5)与模型组比较，Bax与bcl一2表达比例在MRS组中明显降低(与NGF组相当， po．01)；与bax和bcl一2的表达相对应的，active caspase一3在MRS组中表达显著 降低(与NGF组相当，po．01)。 结论：MRS可以提高Pcl2细胞活力，浓度越高，细胞活力越高；Ap：钓。对 PCI2细胞具有毒性作用，有明显的剂量依赖性，也有一定时间依赖性：MRS对A B。渊致PCI2细胞损伤有保护作用，可提高细胞活力，降低早期凋亡率；且可能 通过调控bax、bcl一2和active caspase一3蛋白表达实现。 第二部分 搿更年春一对AB衢书致大鼠海马神经细胞损伤的保护作用 目的：研究中药“更年春”对Ap。Ⅻ致大鼠海马神经细胞损伤的保护作用 及可能的作用机制。 方法：取孕16—18天的SD大鼠，培养胎鼠的海马神经细胞。细胞分五组处 理同PCI2细胞，分别处理后检测LDH释放量以检测细