her2抑制剂tak165协同全反式维甲酸诱导人急性髓系白血病细胞分化的药效及其机制研究药学专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 HER2抑制剂TAKl65协同全反式维甲酸诱导人急性髓系白 血病细胞分化的药效及其机制研究 浙江大学药学院13级药学 硕士研究生：刘宇佳 导师：何俏军教授 中文摘要 研究目的： 急性髓系白血病(Acute myelogenous leukemia，AML)是一种血液系统肿瘤， 严重威胁人类生命健康。AML的重要标志是存在严重的髓系分化障碍。所以，目 前认为可以将诱导分化治疗作为临床治疗AML的一种有效的治疗策略。全反式 维甲酸(A11．transretinoic acid，ATRA)是第一个成功用于临床治疗急性早幼粒细胞 白血病(Acute promyelocytic leukemia，APL，AML型M3)的分化诱导剂。然而， APL患者在大量使用ATRA时会出现金反式维甲酸耐药、复发等现象，同时还会 产生不同程度的不良反应。此外，ATRA除了对APL患者有较好的疗效，对于 AML的其他亚型，都没有显著的治疗效果。因此，寻找更为高效低毒的诱导分化 药物或采用药物联合方案完善维甲酸诱导分化治疗策略是解决上述问题的关键途 径。 人表皮生长因子受体2(HER2)是ErbB家族中的重要成员，参与细胞生长， 增殖，粘附和分化等重要生命过程的调控。有文献报道，抑制HER2的信号通路 对白血病可能有潜在的治疗作用。TAKl65(Mubritinib)是一种HER2的特异抑制 剂，其应用于肿瘤的治疗目前仍处于临床研究阶段。有文献报道，TAKl65可以通 过介导细胞凋亡，进而针对包括AML在内的多种肿瘤细胞发挥抗肿瘤作用。但是， 关于TAKl65调控ATRA介导的AML细胞分化目前尚没有文献报道。因此，本课 题拟通过实验研究HER2抑制剂TAKl65(Mubritinib)与ATRA联合应用，诱导 AML细胞的分化效应，并进一步探讨其内在的分子机制。 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 研究方法： 选用人白血病细胞株HL60和NB4为主要研究对象，考察TAKl65对于AML 细胞的增殖以及周期分布的影响，并检测TAKl65与ATRA合用对于AML细胞的 诱导分化作用。采用台盼蓝拒染法结合血细胞计数板计数检测细胞增殖情况，描 绘细胞生长曲线和存活率曲线；细胞经碘化丙啶(propidium iodide，PI)染色结合 流式细胞术检测了细胞周期分布的变化情况；应用Western blot检测细胞周期相关 蛋白和分化相关蛋白(c—Myc、p21、p27、C／EBPl3、PU．1)的表达；细胞经CDllb．PE 抗体孵育后通过流式细胞术检测细胞表面分化抗原CDllb的表达；应用硝基四氮 唑蓝(NBT)还原法检测细胞分化能力；应用瑞氏．吉姆萨染色法检测细胞形态学 变化；应用Real．time PCR检测细胞内分化相关因子(PU．1，C／EBPB、C／EBPE) 的mRNA表达水平； 选用人白血病细胞株HL60和NB4为主要研究对象，考察TAKl65和ATRA 诱导AML细胞分化的分子机制。细胞经CDllb．PE抗体孵育后通过流式细胞术检 测细胞表面分化抗原CDllb的表达；应用硝基四氮唑蓝(NBT)还原法检测细胞 分化能力；应用Real．time PCR检测细胞内RARB、PXN的mRNA表达水平；应 用Western blot检测HER2，RARa蛋白表达水平，检测分化启动因子STATl表达 及活化水平(STATl、p．STATl$727)，MAPK家族蛋白表达以及活化水平(MEK、 p-MEK、ERK、p-ERK、p38、p-p38、JNK、P-JNK)；利用HER2单克隆抗体药 物赫赛汀研究HER2靶点在TAKl65与ATRA协同诱导AML细胞分化中的作用。 用携带pCCL．RARa的慢病毒载体转染HL60R细胞，通过过表达RARa检测其在 TAKl65与ATRA协同诱导AML细胞分化过程中的作用。用携带shRNA．STATl 的慢病毒载体转染NB4细胞，通过沉默STATl检测其在TAKl65与ATRA协同诱 导AML细胞分化过程中的作用。选用MEK／ERK特异性抑制剂PD98059和U0126、 p38特异抑制剂SB203580和JNK特异性抑制剂SP600125，研究MAPK信号通路 在TAKl65与ATRA协同诱导AML细胞分化过程中的作用。 III 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学