wbp2在神经胶质瘤中的结构功能和机制探索化学生物学专业论文.docxVIP

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2019-01-20 发布于上海
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wbp2在神经胶质瘤中的结构功能和机制探索化学生物学专业论文.docx

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wbp2在神经胶质瘤中的结构功能和机制探索化学生物学专业论文

目目录 2．2．9筛选稳定转染细胞系 26 2．2．10 MTT细胞增殖实验 26 2．2．11细胞划痕实验．27 2．2．12 Transwell细胞迁移实验 27 2．2．13 PI单染测细胞周期实验流程 28 2．2．14 Western实验步骤 29 2．2．15提取细胞RNA步骤．．30 2．2．1 6 RNA反转录成cDNA 30 2．2．17实时定量PCR 31 2．3本文的研究思路．32 第三章实验结果与分析 33 3．1 pGEX4T-I．WBP2质粒的构建．．33 3．2原核诱导GST、GST-WBP2蛋白的表达 35 3．3 GST-WBP2融合蛋白的纯化．36 3．4 GST蛋白标签的切除及融合蛋白活性的验证．．37 3．5 U25。l细胞的培养。38 3．6利用GST large scale puildown实验寻找与WBP2相互作用的未知蛋白．．：．：I{I 3．7利用免疫荧光验证WBP2、Homer3在U251细胞中的定位 40 3．8构建pEGFP．NI．Homer3质粒 40 3．9将pEGFP．N1．Homer3质粒转染到U251细胞系中并观察转染效率．43 3．10利用GST pull down实验验证WBP2与Homer3是否有相互作用．43 3．11构建pEGFP．C1．WBP2质粒．44 3．12筛选稳定转染pEGFP-C1．WBP2和pEGFP-CI空载的U251细胞系．46 3．13过表达或者降低U251细胞系中WBP2的表达是否会影响Homer3的表 j迭 47 3．14过表达或者降低U251细胞系中WBP2的表达是否会影响细胞的迁移．49 3．14．1划痕实验．49 万方数据 3．14．2 3．14．2 Transwell迁移实验 50 3．15 MTT细胞增殖实验。5l 3．16细胞周期实验 52 第四章总结与展望 55 参考文献 59 硕士期间参与的项目及研究成果 63 致谢．65 万方数据 CONTENTSCONTENTS CONTENTS CONTENTS Abstract in Chinese．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． I Abstract ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． III Chapter I Introduction ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 1．1 Background of Leukoariaosis and glioma ．1 1．1．1 Background of Leukoariaosis ．．1 1．1．2 Background ofglioma ．．1 1．2 Molecular structure and biological function of WBP2 ．．2 1．2．1 Molecular structure ofWBP2 一2 1．2．2 Biological function ofWBP2 4 1．3 Background of Homer family 8 1．4 Purpose and significance of this project ．．10 ChapterⅡMaterials and Methods 11 2．1 Materials ．．11 2．1．1 Bacterial strains，plasmids，cell line 1 1 2．I．2 Reagents 1 1 2．1．3 Apparatus ．1 2 2．1．4 Solution ．1 3 2．2 Methods ．15 2．2．1 Plasmid construction ．．1 5 2．2．2 GST pulldown 1 8 2．2．3 GST large scale pulldown 1 9 2．2．4 Silver stain ．．22 2．2．5 Recycling protein from silver staining gel ．．22 2．2．6 Preparing protein sample for mass spectrometry ．23 2．2．7 Plasmid transfection 25 2．2．8 siRNA transfection ．．25 万方数据 CONTENTS2．2．9 CONTENTS 2．2．9 Screening of stable transfected cell lines ．26 2．2．1 0 MTT cell proliferation assay 26 2．