基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα.PDFVIP

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１５Ｆｅｂ；３１（２）：２８９～９３ ·２８９· 网络出版时间：２０１５－１－９１３：３７　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｏｉ／１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１５．０２．０２８．ｈｔｍｌ ◇实验方法学◇ 基于报告基因检测的ＰＸＲ、ＦＸＲ和ＬＸＲα 激动剂高通量筛选模型的建立 庄嘉琅，曾　行，钟国平，金　晶，苟晓丽，毕惠嫦，黄　民 （中山大学药学院药物代谢与药动学实验室，广东广州　５１０００６） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１５．０２．０２８ 粒分别共转染到工具细胞中，优化共转染比例，并考察阳性 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１５）０２－０２８９－０５ 药与萤光素酶报告基因表达强度的量效关系、模型特异性和 稳定性。结果　 根据Ｒｅａｌｔｉｍｅ定量ＰＣＲ结果，模型选用 中国图书分类号：Ｒ３９２．１１；Ｒ３９４．２；Ｒ３９４．３；Ｒ９６５１ ① 低表达ＰＸＲ、ＦＸＲ和ＬＸＲ 的ＨＥＫ２９３细胞作为工具细胞； 摘要：目的　 建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型， α 用来发现ＰＸＲ、ＦＸＲ和ＬＸＲ 受体激动剂。方法　利用Ｒｅ ② 根据不同共转染比例对报告基因活性的结果，ＰＸＲ、ＦＸＲ α 和ＬＸＲ 报告基因药物筛选模型的报告基因和过表达质粒 ａｌｔｉｍｅ定量 ＰＣＲ方法比较 ＨＥＫ２９３、ＨｅｐＧ２和ＬＳ１７４Ｔ细胞 α 比例，最终分别选择１∶１、２∶１和２∶１； 模型中，报告基 中内源性核受体 ＰＸＲ、ＦＸＲ和 ＬＸＲ 的表达量，将 ｐＳＧ５ ③ α 因活性均与相应阳性药物（ＰＸＲ／Ｒｉｆ、ＦＸＲ／ＣＤＣＡ和ＬＸＲ／ ｈＰＸＲ和 ｐＧＬ３ＸＲＥＭＣＹＰ３Ａ４、ｐＥＧＦＰＮ３ｈＦＸＲ和 ＥｃＲＥ α Ｔ０９０１３１７）呈剂量依赖性增长； 仅 ＰＸＲ激动剂 Ｒｉｆ、ＦＸＲ ＴＫＬｕｃ、ｐＣＭＸＦＬＡＧｈＬＸＲ 和 ｐＧＬ３ＸＲＥＭＣＹＰ３Ａ４等质 ④ α 激动剂ＣＤＣＡ和ＬＸＲ 激动剂Ｔ０９０１３１７可分别明显增加相 α 应筛选模型的报告基因活性，分别重复５次试验后，计算得 收稿日期：２０１４－１０－１０，修回日期：２０１４－１１－０５ Ｚ′值分别为０５８、０６６和０６３。结论　该研究建立的ＰＸＲ、 基金项目：广东省新药设计与评价重点实验室开放基金（Ｎｏ２０１１