蛋白质沉淀反应(实验).ppt

蛋白质的沉淀反应 一、目的要求： 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义 二、实验原理： 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水，甚至变性，则以固体形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应。 蛋白质的沉淀反应可分为两类。 （1）可逆的沉淀反应 蛋白质虽然沉淀析出，但蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。属于这类反应的有；蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。 （2）不可逆沉淀反应 此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热、重金属盐、过酸、过碱、震荡、超声波或某些有机酸都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性 三、实验材料与设备： （一）材料 5ml鲜鸡蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌后用4-8层纱布过滤，新鲜配制。 （二）试剂 蛋白质溶液 取10ml蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后，用纱布过滤 浓蛋白溶液 鸡蛋清稀释2倍（1:1）方法同上 饱和硫酸铵，2%硝酸银，0.5%醋酸铅溶液 浓盐酸，浓硫酸，浓硝酸， 1%硫酸铜，0.1%醋酸，10%醋酸， 饱和氯化钠溶液，10%NaOH溶液，1%醋酸 10%鞣酸，饱和苦味酸溶液，0.01%NaOH （三）设备 水浴锅 滤纸，漏斗 吸管 试管及试管架 玻棒 四、实验步骤： （一）蛋白质的可逆沉淀 蛋白质的盐析 过滤 2ml蛋白质浓溶液 等体积饱和 浓硫酸溶液 沉淀 清夜 硫酸铵粉末 沉淀 加水 观察现象 （二）蛋白质的不可逆沉淀 1.重金属离子沉淀蛋白质 重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。 取3支试管，加入蛋白质溶液1mL，加入0.01%NaOH，再加2%硝酸银溶液1滴、0.5%乙酸铅1滴和1%硫酸铜1滴，振荡试管，观察生成沉淀的颜色和量。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？ 2.强酸沉淀蛋白质 取3支试管，各加入10滴蛋白质溶液，分别沿管壁加入等量浓盐酸，浓硫酸和浓硝酸10滴。观察两溶液界面处白色环状蛋白质沉淀的生成。然后摇动试管，蛋白质沉淀应在过量的盐酸和硫酸中溶解，在含硝酸的试管中蛋白质沉淀不会溶解。（磷酸不能使蛋白质沉淀，无机酸沉淀蛋白质的原因可能是蛋白质颗粒脱水的结果，过量的无机酸可使沉淀在溶解） 3 生物碱试剂沉淀蛋白质 取2支试管，各加2ml蛋白质溶液，加1%的醋酸4~5滴，分别滴加鞣酸和苦味酸溶液数滴，观察结果。 4.加热沉淀蛋白质 注意事项 实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当准确。 作业 列表说明各实验的颜色变化，说明原因。 思考题: 1.为什么蛋清可作为重金属中毒的解毒剂 2、在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？ 3.在蛋白质的可逆沉淀反应中，为何要用蛋白质氯化钠溶液？ 谢 谢