第五章-巴比妥类药物分析.pptVIP

1. 直接测定的紫外分光光度法 本法是将样品溶解后，根据溶液的pH值选用其相应的?max处进行直接测定。 2．提取分离后的紫外分光光度法 根据巴比妥类药物具有弱酸性，在氯仿等有机溶剂中易溶，而其钠盐在水中易溶的特点。 测定时取供试液适量，加酸酸化后，用氯仿提取巴比妥类药物。氯仿提取液加pH7.2-7.5缓冲溶液，振摇分离弃去水相缓冲液层。 再用0.45mol／L氢氧化钠溶液提取氯仿层中的巴比妥类药物，将碱提取液调节至适宜pH，然后选择相应的吸收波长进行测定。 多组分混合物不经分离的定量方法——计算分光光度法 解方程组法 双波长分光光度法 差示分光光度法 导数光谱法 三波长法 (2)必要条件 供试品在不同的化学环境中以不同的分子形式存在，它们的吸收光谱有显著的差异。 干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变。 差示分光光度法与双波长法的异同 区别： 差示分光光度法 两种介质（溶媒）的溶液，一个波长 双波长法 两个波长 一种溶液 (1)复方苯巴比妥散中苯巴比妥的差示分光光度测定法： 本法以pH8.04与pH5.91的磷酸盐缓冲液为溶剂，240nm为测定波长，用差示分光光度法测定了复方苯巴比妥散中苯巴比妥的含量。 定量依据: 复方苯巴比妥散中的阿司匹林和水杨酸等成分在pH5.91和8.04条件下的紫外吸收光谱重合，ΔA=0。 而苯巴比妥在240nm波长处，在pH5.91和8.04条件下ΔA的值最大。因此ΔA∝C苯巴比妥 线性关系考察： (2)差示分光光度法测定血清中苯巴比妥的浓度： 血清以二氯甲烷在酸性条件下二次提取，利用苯巴比妥在不同pH值的介质中吸收度之差值，按差示分光光度法测定血清中苯巴比妥浓度。 血清中苯巴比妥浓度的线性范围5μg／ml~140μg／m1；回收率为101.2％±2.7％；日内精密度为2.5l％±0.23％；日间精密度为2.70％±0.25％。 本法线性范围宽；回收率高，适用于中小医院开展治疗药物监测。 (五)高效液相色谱法（HPLC） HPLC多用于制剂及体液中巴比妥类药物的含量测定。 目前临床上为了提高巴比妥类药物的疗效、减少毒副反应、为超剂量中毒诊断治疗提供依据，需要进行血清浓度监测，而HPLC是最常用的监测方法之一。 血清中苯巴比妥浓度的反相高效液相色谱法 苯巴比妥、苯妥英和卡马西平均为临床上常用的抗癫痫药物，其血药浓度与疗效和毒副反应密切相关， 临床上要进行血药浓度监测。 其测定方法如下： 1、色谱条件 色谱柱为Lichrosorb C18(250mm×4mm，10μm)；流动相为甲醇-10mmol／L硫酸二氢钾(58：42)；检测波长210nm，灵敏度0.02AUFS；流速1ml／min。 2、样品处理 精密量取含血清0.2ml，加1mol/L磷酸缓冲液0.2ml，混匀；加非那西丁醋酸乙酯（5μg/ml）5.0ml（内标），振摇1min，离心，取酯层N2气流挥干，甲醇100μl溶解残留物，进样20μl。 计算： 苯巴比妥钠(mg)：= 5×1.096×Cs×(Au /As) 5=250×(100/5)×(1/1000) 取两份相等的供试溶液，分别制成两种不同的化学环境（如在其一中加酸、碱或缓冲液改变溶液的pH，或在其一中加能与供试品发生某种化学反应的试剂），然后将两者分别稀释至同样浓度，于适当波长处，测其吸收度的差值（?A值）。 3. 差示分光光度法（?A法） (1)测定方法 供试品在两种不同的化学环境中分别以x、y 表示，干扰物用 z 表示 (3) 定量依据 吸收度差值（?A）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，即干扰组分的干扰被消除。 可用对照法或标准曲线法定量 保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰。 (4) 特点 相同： ΔA最大， ΔA∝C待测 均不需分离，消除共存组分的干扰 样品测定 3、线性范围和最低检测限 4、回收率与精密度试验 小 结 1．熟悉巴比妥类药物的化学结构与分析方法间的关系： （1）弱酸性 （2）水解性 （3）与重金属离子的反应 2．掌握巴比妥类药物的鉴别： （1）与重金属的反应 （2）特殊取代基（不饱和烃基取代、芳环取代）和硫元素的鉴别试验 3．掌