转座子插入位点的鉴定方法.pdfVIP

生 物 技 术 通 讯 ZX@@XKM )L =)[@X6\L[Z[]^ _17F!$ L1FS ‘5D; #Q SS 文章编号!!TP#U#QVSPSSPW 综 述 转座子插入位点的鉴定方法 王瑞白，阚飙 中国疾病预防控制中心 传染病预防控制所，北京 !##$ ［摘要］转座子是基因组中的可移动成分，已经成为分子生物学研究中的一种有用的研究工具。转座子插入位点识别的难 易决定着转座子应用的潜能。本文介绍曾应用过的几种转座子插入位点周围染色体序列的克隆测序方法及其优缺点。 ［关键词］转座子；旁侧序列；鉴定方法 ［中图分类号］%’ ［文献标识码］( !#$%’( )#%*+, ’+- %*# .#$+/# 0#12#$3# 456$7$8 %*# 9-6$,:+,+$, ! #$ % ’()*’+ , # -’*. )*+,-,.,/ 012 )*0/3,-1.+ 4-+/5+/ 61*,217 5*8 92/:/*,-1*; 6-*/+/ 6/*,/2 012 4-+/5+/ 61*,217 5*8 92/:/*,-1*; =/--*? !##$; 6-*5 ［ ］ ;,%-63% @25*+A1+1*+ 52/ ,/ B1:/5C7/ /7/B/*,+ -* ?/*1B/ 5*8 5:/ C/31B/ 5 .+/0.7 ,117 012 B17/3.752 C-171?D 2/E +/523F @/ .+/0.7*/++ 10 ,25*+A1+1*+ 52/ 8/3-8/8 CD ,/ 35A5C-7-,D ,5, ,/ +/G./*3/+ 075*H-*? ,/ ,25*+A1+1* -*+/2, +-,/ 52/ -+175,/8 5*8 +/G./*3/8F )* ,-+ 52,-37/ ,-+ -8/*,-0D B/,18+ I/2/ 2/:-/I/8F ［ ］ =#( +-, ,25*+A1+1*J 075*H-*? +/G./*3/J -8/*,-0D B/,18 转座子是首先在玉米中发现的生物体基因组上的可移动的 该方法的操作步骤为，将转座子插入后形成的突变体的染 遗传元件，在细菌和各类真核生物中存在。转座子的存在和在基 色体或质粒 4L( 用限制性内切酶消化，凝胶电泳分离后，以转 因组中的转移可以直接或间接地造成基因重排，在基因组中引 座子上的片段为探针，进行M1.,/2* 杂交，确定转座子插入位点 入变异。利用转座子可移动的特性，构建了许多包含转座子的人 所在片段的大小，即在电泳分离条带上所处的位置。然后将这一 工载体，发展了一些基于转座子的分子生物学研究方法。例如， 部分4L( 回收，连接在如AN6!’ 等克隆载体上，转化大肠杆菌， 转座子突变已被广泛应用于与生物体某种表型相关的基因的识 并根据一定的基因标记筛选克隆有转座子插入位点的片段的菌 O!PQR 别，成为一个非常有用的分子生物学的研究工具。 株 。 当转座子插入生物体的染色体后，插入部位的基因的功能 限制性内切酶的选取是整个实验成败的关键。选取的内切 通常会丧失，在同一个操纵子内的下游基因的表达也会因为极 酶一般要符合S 个条件。第一，在发生转座的转座子片段上没有 性效应而受到抑制。相反，如果在转座子内含有组成性表达的启 或仅有 个酶切位点，或者 个以上的酶切位点是分布在筛选