生长激素知识.pptVIP

* 肠道屏障功能障碍引发MODS是有其病理、生理基础的 1）最易受到应激激素作用而缺血缺氧：肠道血液回流至门静脉，门静脉的压力梯度小，且以a受体占优，在应激状态下儿茶酚胺、垂体后叶素等都能使门脉明显收缩，造成肠道缺血缺氧。 通常临床可见择期手术、创伤、感染、烧伤等患者肠鸣音和蠕动明显减弱或消失。 肠道低灌注、肠道休克 在严重创伤、手术、感染、烧伤和休克使，必然产生保存生命的应激反应（SR）、分泌应激激素（SH）。SH把血液从“次要”脏器如：胃肠、肝脾、肾脏等部位重新分布到“重要”脏器如：心、脑、肺等。造成肠道低灌注、肠道休克。在发生SR时胃肠血管强烈收缩，一方面血管痉挛供血下降；另一方面组织过度兴奋而氧需求增加，产生无氧酵解。因此，SR的神经内分泌反应造成了高代谢、高动力循环、高消耗状态，内脏处于缺血、缺氧状态。 2）对低灌注和缺血再灌注最为敏感而易释放炎性介质：-----但持续的缺氧、长时间高浓度儿茶酚胺的刺激；内源性阿片肽对肾上腺素能受体（AR）的抑制等原因，使全身AR敏感性逐步降低，出现所谓的AR失敏状态。此时内脏血管重新开放，造成内皮细胞和内脏组织细胞的缺血再灌注（IR）,引起微循环血流淤滞、血小板粘附、释放细胞介质等，使包括肠道在内的内脏进入淤血缺氧。 动物和临床实验表明：在创伤的应激状态下，小肠对低灌注特别敏感，易产生内毒素扩散和细胞介质释放（徐世豪，中国危重病急救医学，1995，7（6）；小肠对缺血再灌注敏感的机制是：组织缺血时ATP分解为次黄嘌呤，次黄嘌呤脱氢酶迅速转变成黄嘌呤脱氢酶，由再灌注而获得氧形成氧自由基，在肠组织中次黄嘌呤脱氢酶浓度最高。 -----内脏IR后，释放大量毒性氧化代谢产物（过氧化氢），其中中性多核粒细胞可释放各种酶如：黄嘌呤氧化酶和氧自由基，加速、加重肠缺血再灌注期间肠粘膜的损伤。 * * SIRS－全身性炎症反应综合征 SEPSIS－脓毒血症 MODS－多器官功能障碍综合症 * 生长激素对肠屏障功能的保护有二方面的作用，即维持肠粘膜机械屏障的完整和增强免疫屏障首先我们看一下对肠粘膜机械屏障的作用。机理：生长激素可维持肠粘膜机械屏障的完整，主要通过促进肠上皮对谷氨酰胺的利用，从而促进了肠上皮细胞的生长，修复损伤的肠粘膜机械屏障 上调肠粘膜IGF-1mRNA的表达 —促进蛋白质合成与粘膜的生长、修复 激活谷氨酰胺酶活性 —肠粘膜细胞摄取Gln增多 ——防止肠粘膜萎缩、肠细菌易位 * TPN－全胃肠外营养(Total Parenteral Nutrition,简称TPN)TPN系指通过静脉途径给予适量的蛋白质(氨基酸)、脂肪、碳水化合物、电解质、...  * 载体：是目的基因(hGH基因）带入宿主细胞的运输工具 所谓重组DNA，在这里主要就是指将目的基因（hGH基因）接入载体基因组序列中，重新组合成新的DNA序列的过程。 常用载体有，质粒、噬菌体、病毒等，思真使用的是：质粒载体PBR322。 * （主要提一下BP病毒问题）： 生产思真时，重组载体包括以下部分： 质粒本身的DNA序列、hGH的编码基因、 金属硫蛋白编码片段和BP病毒的一个片段 BP病毒就是牛乳头瘤病毒，需要注意的是，在这里重组入载体的BP病毒只是一个片段，缺失了编码病毒蛋白质外壳的基因序列，因而不会在宿主细胞内表达完整的病毒颗粒，完全没有致病性。 它的作用是利用病毒基因非常强的“感染”性，来促进重组载体进入宿主细胞，提高载体对宿主细胞的转染率。 乳头瘤病毒在科研和医疗中早已被广泛应用，例如在基因治疗中，同样也利用到BP病毒感染受体细胞的特性，将其作为病毒载体，运载外源基因；又如，解离乳头瘤病毒制成假性病毒，作为疫苗，预防和治疗经黏膜途径感染的疾病，如艾滋病、乳头状瘤、尖锐湿疣、宫颈癌等。 * （思真使用的是真核宿主细胞） 生产思真选用的宿主细胞是中仓鼠乳腺细胞C127，和人类细胞一样都是真核生物哺乳动物细胞。 由于具有完整的酶系和细胞器，C127能在细胞内直接生产具有完美生物活性的hGH分子 * 两种技术中产物表达的不同，主要在于蛋白质活性方面。 首先，介绍一些GH活性的背景情况： 每种蛋白质都有自己固定的构象，只有在具备了准确的空间结构前提下才能与受体结合发挥作用。所以蛋白质的活性主要是指具有准确的空间构象。 hGH的空间构象主要是由两个二硫键来实现的，这两个键必须加载在固定的位点（182－189、53－165）上，才能确保hGH分子准确的空间结构。 二硫键是通过氧化还原方法加载在两个半胱氨酸（CYS）基团之间形成的。后者是还原性的基因，二硫键是氧化性质的。 * 真核细胞具有粗面内质网这个特殊的细胞器，能直接生产具有准确二硫键、准确空间构象的GH分子。 内质网