单细胞内多种活性小分子同时定量检测与微流控分析方法学分析-分析化学专业论文.docxVIP

山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 4 结论...................................................................................................................... 62 参考文献.................................................................................................................. 6ω 第四章 基于连续门式进样的微流控系统同时检测 PC-12 单细胞内一氧化氮和超 氧阴离子 66 1 前言...................................................................................................................... 66 2 实验部分.............................................................................................................. 67 ω 结果与讨论 72 4 结论...................................................................................................................... 76 参考文献.................................................................................................................. 77 总结与展望..................................................................................................................80 攻读硕士期间发表的学术论文以及硕士期间参加课题：......................................82 致 谢..........................................................................................................................8ω 2 摘 要 单细胞定量分析作为实现生命科学精细化最重要、最基本、最值得期待的一 种前沿技术，对生命奥妙诠释以及疾病机制与诊疗手段的探索具有重要意义。但 是，由于细胞体积小，细胞内组分含量低、成分复杂，对分析方法的单细胞操纵 检测灵敏度、选择性和分析通量要求高等限制，目前仍缺少单细胞定量检测的方 法与技术。这一现状与其巨大意义和强劲需求之间不匹配的现象已经成为一个挑 战和前沿的研究课题，并获得了前所未有的关注。如国际著名学术杂志《科学》 将单细胞定量检测技术列为201ω年科学热点的榜首。 目前，商品化的单细胞分析仪器主要有流式细胞术和荧光显微术。这些仪器 通过使用荧光探针，能对完整的细胞进行识别和分类，但不能对单细胞内的组分 进行分离分析，难以得到定量信息。近年来，微流控芯片作为一种以在微米尺度 空间对纳升至皮升级流体进行操控为主要特征的微型分析技术，具有分析速度 快、试样试剂消耗少、试样污染小、功能集成等特点。特别是微流控芯片与高灵 敏检测技术的联用，可以将单细胞进样、溶膜、电泳分离和胞内组分检测等集成 在一块微小芯片上完成，为单细胞定量检测提供了契机。然而，目前仍缺少微流 控芯片上有效操纵单细胞实现单个目标细胞连续进样和胞内组分准确测定的方 法，因此，发展高通量定量检测单细胞内多组分的方法与技术，对于单细胞层面、 分子水平上生命本质的阐释及疾病机制的探索具有重要意义和潜在应用价值。 NO 是一种重要的信使分子，能够影响对很多生理过程，例如心血管系统的 血压调节，中枢神经系统和周围神经系统的神经传递以及免疫防御等。因 NO 的 产生而导致的细胞异质性对许多疾病产生影响，包括炎症，心血管疾病和癌症等。 因此，定量检测单细胞内的 NO 不仅能帮助人们发现单细胞内的生物化学变化， 而且还可以使我们更好的认识生物化学的重要性，例如细胞的代谢，信号转导和 疾病治疗等。 -.另外，单个细胞内活性