钙网织蛋白通过调节黏附分子促进类风湿关节炎滑膜炎形成的分子机制研究-临床医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行 研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致 谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过 的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在 论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论 文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以 供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入 有关数据库。 必威体育官网网址 ，在 年解密后适用本授权书。 本论文属于  不必威体育官网网址 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 作者签名： 日期： 年 月 日 导师签名： 日期： 年 月 日 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种以慢性关节滑膜炎症及血 管翳形成为主要病理特征的系统性自身免疫病。RA 的发病机制尚不十分清楚， 有研究报道钙网织蛋白（Calreticulin, CRT）可能参与了 RA 滑膜炎症的形成。 本课题在前期研究基础上，采用 ELISA 及免疫荧光的方法检测了 CRT 及黏附分 子在 RA 患者血清、滑液以及滑膜中的表达，并分析血清、滑液中 CRT 与黏附 分子含量的相关性；然后利用脐静脉内皮细胞体外培养模型分析了 CRT 对黏附 分子表达的调节作用及其分子机制。通过研究 CRT 调节细胞黏附作用进而参与 滑膜炎症形成，从新的角度探讨 RA 的病理机制，为 RA 的临床诊断和治疗奠定 实验基础。 方法 1. 本研究所选取的患者标本均来自 2013 年 2 月至 2014 年 2 月天津医科大学总 医院风湿免疫科和天津医院关节外科中心，其中血清标本包括 RA 患者 60 例， 女 47 例，男 13 例，年龄 55~79 岁。关节滑膜和滑液标本：RA：10 例，其中 女 7 例，男 3 例，年龄 52～62 岁；OA：14 例，其中女 10 例，男 4 例，年龄 56～69 岁。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测 RA 血清和滑液中 CRT 及 黏附分子的含量。 2. 采用免疫组织荧光方法分析 CRT 和黏附分子在 RA 及 OA 滑膜中的定位。 3. 分离培养原代脐静脉内皮细胞，分析 CRT 对 ICAM-1 表达的影响。 4. 免疫印迹（Western blot）检测 CRT 对 Akt 及 eNOS 活化的影响，并分析 PI3K 及 eNOS 抑制剂作用后 ICAM-1 的表达。 统计学分析采用 SPSS17.0 软件。计量资料以 x ??s 表示，两组间比较采用 Student-Newman-Kenls 检验进行统计分析。检验水准为双侧?=0.05。 结果 1. 可 溶 性 CRT 在 RA 患者 血 清 及 滑 液 中 表 达 量 为 (5.359±2.27) ng/ml ， (4.997±0.826) ng/ml；可溶性 ICAM-1 以及 VCAM-1 在血清中的含量分别为 (485.772±197.612) ng/ml，(419.609±188.338) ng/ml；在关节液中为(579.467±70.604) ng/ml 和(511.368±101.39) ng/ml。分别分析 RA 患者血清和滑液中 CRT 与 I sICAM-1 以及 CRT 与 sVCAM-1 含量的相关性。结果显示，血清中 CRT 与 sICAM-1 及与 sVCAM-1 均呈正相关（R2 分别为 0.612，0.554）差异具有统计学 意义。关节液中 CRT 与 sICAM-1 及与 sVCAM-1 也呈正相关（R2 分别为 0.710， 0.405），差异具有统计学意义。 2. 免疫组织荧光结果显示，与 OA 组相比，CRT 及黏附分子 ICAM-1，VCAM-1 在 RA 滑膜组织的表达均增高；其中 CRT 在 RA 的滑膜衬里层和衬里下层，血 管内皮细胞及血管周围均有较强的表达，而在 OA 的衬里层和血管周围有较弱 的表达。结果显示，CRT 在两组患者滑膜组织中的表达量和定位均存在显著的 差异。ICAM-1 与 CRT 共同表达在 RA 滑膜组织的血管内皮细胞上，VCAM-1 则主要定位在 RA 滑膜衬里层细胞。 3. CRT 作用于内皮细胞使黏附分子的表达上调，且具有剂量依赖性。当 CRT 浓 度为 5ng/ml 时，与空白对照组无统计学差异（平均荧光强度 MFI：(98.7±10.51)）， 当浓度