烟曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆表达及酶学性质分析.PDFVIP

谢贻 等/烟曲霉 β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析 1245 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology September 25, 2013, 29(9): 1245−1253 /cjbcn ©2013 Chin J Biotech, All rights reserved 工业生物技术 烟曲霉 β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质 分析 1 1 2 2 1 谢贻 ，欧阳浩淼 ，黄日波 ，陈东 ，金城 1 中国科学院微生物研究所 真菌学国家重点实验室，北京 100101 2 广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室 国家非粮生物质能源工程技术研究中心 广西生物炼制重点实验室，广西 南宁 530007 谢贻, 欧阳浩淼, 黄日波, 等. 烟曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析. 生物工程学报, 2013, 29(9): 1245−1253. Xie Y, Ouyang HM, Huang RB, et al. Cloning, expression and characterization of β-glucosidase from Aspergillus fumigatus . Chin J Biotech, 2013, 29(9): 1245−1253. 摘 要: 探索获得优良的 β- 葡萄糖苷酶基因，对实现其工业化生产具有重要意义。烟曲霉Aspergillus fumigatus 基因组中含有一个 bgl 基因 (1 752 bp) ，编码的蛋白约65 kDa ，推测为属于糖苷水解酶家族的β- 葡萄糖苷酶。 将bgl 基因克隆并构建了重组表达载体pGEX-bgl ，转化大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3) ，经IPTG 诱导获 得表达。重组蛋白经亲和层析纯化后，以七叶苷为底物进行了酶学分析，结果表明该酶的最适温度是45 ℃， 最适pH 在5.5~6.0 之间，对七叶苷的Km 值为 17.7 mmol/L。该酶在pH 4~7 范围内稳定；70 ℃保温2 h 后仍能 保持 60 ％的活性。金属离子和化学试剂对酶活性有不同程度的影响，Ca2+对重组酶有轻微的激活作用，而 SDS 可强烈抑制其活性。由于其相对于真菌来源的其他葡萄糖苷酶稳定性较高，为进一步的研究与应用奠定了基础。 关键词: 烟曲霉，β- 葡萄糖苷酶，原核表达，酶学性质 Cloning, expression and characterization of β-glucosidase from Aspergillus fumigatus 1 1 2 2 1 Yi Xie , Haomiao Ouyang , Ribo Huang , Dong Chen , and Cheng Jin 1 State Key Laboratory of Mycology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China Received: March 11, 2013; Accepted: April 1, 2013 Supported by: Provincial Cooperation for Chinese Academy of Sciences. Corresponding author: Cheng Jin. Tel: +86- 10 Fax: +86-10 E-mail: jinc@ 中国科学院院地合作项目资助。 1246 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech September