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流式胞内分析-ThermoFisherScientific
流式胞内分析 从不同角度了解细胞 胞内分子的染色和检测有助于实现不同细胞亚群的识别和细 胞状态的鉴定。对基本的流式细胞表面染色方案进行改良优 化，即可实现单细胞水平上表面分子、细胞内抗原、细胞信 号传导磷酸化和RNA转录本的同时检测。分析技术的提高可 以帮助您更好地了解生物学并获取更伟大的发现。 目录 胞内染色 4 细胞因子抗体 6 趋化因子抗体 9 效应分子抗体 10 其他胞浆抗体 11 核内染色和转录因子抗体介绍 12 胞内染色缓冲液的选择 15 固定破膜处理后不同抗体克隆染色效果 16 特异性磷酸化蛋白的流式分析 17 流式分析基因表达 20 细胞内抗体染色方案 22 方案A ：胞浆蛋白染色 22 方案B：核蛋白染色 23 方案C：固定/ 甲醇 25 3 胞内染色 流式细胞分析的胞内蛋白染色的步骤和缓冲液不同于传统 通常需要阻断表达蛋白的分泌通路，以实现目的蛋白的积 的细胞表面抗体染色。细胞需要先固定，以便稳定细胞膜 聚。常用的是brefeldin A ，它可以阻断蛋白质在内质网内 和交联蛋白质，接着是破膜处理，让抗体进到细胞内结合 的转运；或使用莫能菌素阻断其在高尔基体内的转运。 胞内抗原。Invitrogen™ eBioscience™细胞内固定和破膜 Inv it rogen™ eBioscience ™细胞刺激混合物包含刺激剂 缓冲液可实现胞浆蛋白及细胞器或囊泡中分泌蛋白的最佳 PMA和离子霉素，带或不带蛋白转运(分泌通路)抑制剂，都 染色结果。 采用即用式包装。 适当的刺激条件和蛋白生成的动力学取决于细胞类型和待 我们提供了各种高质量的Invitrogen™ eBioscience™抗体 分析的蛋白质，静息细胞中的分泌蛋白(如细胞因子和趋 用于检测和分析，有多种染料可供选择。 化因子) 的表达水平一般较低。蛋白表达必须经过诱导和 分泌阻断才能通过流式细胞仪检测到。尽管PMA (12-豆蔻
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