多环芳烃暴露对新生儿调节性T细胞的影响-儿科学专业论文.docxVIP

遵义医学院 遵义医学院硕士学位论文 周厚福 万方数据 万方数据 多环芳烃暴露对新生儿调节性 T 细胞的影响 中文摘要 目的：探讨多环芳烃暴露对新生儿调节性 T 细胞的影响。 方法：第一部分：(1)收集 200 例新生儿脐带血，高分辨溶解曲线分析荧光定量法检 测 Treg 细胞，（2）ELISA 法检测脐带血 PAH-DNA 加合物及 IL-4 浓度，（3）问卷调 查随访生后 1-1.5 年，询问婴幼儿是否反复喘息和顽固性湿疹，并询问父母是否患哮 喘等过敏性疾病。第 二部分：收集 7 例新生儿脐带血,分离 CD4+CD25+T 细胞体外 CD3CD28 及 IL-2 诱导培养 3 天，设加 PAHs 组及对照组。流式细胞术检测 Foxp3、 STAT3、STAT5 的表达及 Treg 细胞抑制功能，结合重亚硫酸盐的焦磷酸测序法检测 Foxp3 基因启动子区和 TSDR 区甲基化水平，RT-PCR 检测 DNMT1、DNMT3a、 DNMT3b、IL-4 mRNA 表达水平，ELISA 检测培养后上清液 IL-4 蛋白水平。 结果：第一部分：(1)喘息组和湿疹组 Treg 数量明显低于非症状组（p0.05）。特应性 组 Treg 数量显著低于非特应性组 Treg 数量（p0.05）；特应性组中发生喘息和湿疹组 Treg 数量显著低于非特应性组，但非特异性组仍低于无症状组（p0.05）。（2）喘息 组和湿疹组 PAH-DNA 加合物浓度显著高于非症状组（p0.05）；特应性组中发生喘 息和湿疹婴幼儿 PAH-DNA 加合物浓度低于非特应性组（p0.05）。（3）喘息组和湿疹 组脐带血 IL-4 浓度明显高于无症状组（p0.05）。第二部分：1）PAHs 抑制 Foxp3 表 达及 Treg 细胞抑制功能；2）PAHs 抑制 STAT5 表达，p0.05,上调 STAT3 表达，p0.05； 3）PAHs 增加 Foxp3 基因启动子区和 TSDR 区甲基化；4）PAHs 上调 DNMT1、DNMT3a、 DNMT3b p0.05；5）PAHs 诱导 CD4+CD25+T 细胞产生 IL-4，IL-4 与 STAT5 表达呈 负相关，与 STAT3 表达呈正相关。 结论：（1）宫内遗传因素和 PAH-DNA 加合物可影响 Treg 分化，Treg 细胞分化相对 不足可能是生后婴幼儿对过敏性疾病形成的原因之一。（2）PAHs 抑制新生儿 Treg 细 胞数量及功能，其机制可能与诱导 IL-4 产生，导致 STST5/STST3 表达异常，Foxp3 基因过度甲基化等有关。 2 关键词：DNA 甲基化；调节性 T 细胞；特应性；多环芳烃；DNA 加合物；细胞分 化 3 Effecs of PAHs exposure on regulatory T cells in newborns Abstract Objective: To investigate the possible factors and mechanism of differentiation affecting on neonatal regulatory T cells (Treg)． Methods:1.（1）Collected 200 cases of umbilical cord blood, Treg numbers were detected via DNA demethylation in the Foxp 3 TSDR based on high resolution melting analysis (HRMA)，(2)Concentrations of PAH-DNA adducts and IL-4 in the supernatants of cord blood by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)，(3)At 1 and 1.5 years, whether recurrent wheezing or stubborn eczema in infants and information on parental history of atopic by follow-up questionnaires.2. CD4+CD25+T cell from umbilical cord blood (7 cases)， were treated with (or without) 300 nM phenanthrene for 72 hours in the presence of 100 IU/mL IL-2． the Foxp3，STAT3，STAT5 expression were analyzed