多氯联苯代谢过程中红球菌应激反应相关基因的研究-微生物专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 Thesis for Master’ s degree, Shanxi University, 2015 The study on stress response genes in R04 during metabolism of polychlorinated biphenyls Student Name Yang Wang Supervisor Associate Prof. Xiu-qing Yang Major Microbiology Specialty Biocatalysis and Biotransformation Department Institute of Biotechnology Duration 2012.09-2015.06 June, 2015 目 录 中 文 摘 要 I ABSTRACT III 第一章 文献综述 1 1.1 多氯联苯的危害 1 1.2 红球菌 R04 降解多氯联苯 1 1.3 红球菌 R04 的应激反应 3 HYPERLINK \l _TOC_250000 1.4 与红球菌 R04 应激反应相关的基因 4 1.4.1 运输功能相关基因 4 1.4.2 信号传导相关基因 5 1.4.3 调控作用相关基因 6 1.4.4 防御功能相关基因 7 1.4.5 生长代谢相关基因 8 1.5 本课题研究的意义和目的 8 参考文献 9 第二章 锰过氧化氢酶的纯化及性质 14 2.1 材料 14 2.1.1 菌株和载体 14 2.1.2 主要试剂和仪器 14 2.2 方法 15 2.2.1 锰过氧化氢酶核酸序列比对 15 2.2.2 锰过氧化氢酶二级结构预测 15 2.2.3 表达载体的构建 15 2.2.4 重组蛋白表达与纯化 16 2.2.5 重组蛋白的特性分析 16 2.3 结果 17 2.3.1 锰过氧化氢酶核酸序列分析 17 2.3.2 锰过氧化氢酶的二级结构 18 2.3.3 表达载体的构建和蛋白纯化 18 2.3.4 重组蛋白的特性研究 20 2.4 讨论 23 参考文献 23 第三章 锰过氧化氢酶生理功能的研究 25 3.1 材料 25 3.1.1 菌株和载体 25 3.1.2 培养基 25 3.1.3 主要试剂和仪器 26 3.2 方法 26 RT-PCR 扩增 Mn-CAT-C 26 Mn-CAT-C 基因敲除 26 3.2.3 野生型菌株与缺陷型菌株的生理特性分析 27 3.3 结果 28 3.3.1 Mn-CAT-C 基因的转录表达 28 3.3.2 Mn-CAT-C 基因敲除 28 3.3.3 野生型菌株与缺陷型菌株的生理特性 29 3.4 讨论 33 参考文献 34 第四章 RHOGL007659 生理功能的研究 37 4.1 材料 37 4.1.1 菌株和载体 37 4.1.2 主要试剂和仪器 37 4.2 方法 37 4.2.1 RHOGL007659 基因敲除 37 4.2.2 RT-PCR 扩增降解联苯关键基因 38 4.2.3 野生型菌株与缺陷型菌株的生理特性分析 39 4.3 结果 39 4.3.1 RHOGL007659 基因敲除 39 4.3.2 降解联苯关键基因的转录表达 40 4.3.3 野生型菌株与缺陷型菌株在不同碳源培养下的生物量 41 4.3.4 野生型菌株与缺陷菌型株降解联苯的速率 43 4.4 讨论 43 参考文献 44 第五章 膜蛋白定位及生理功能的研究 45 5.1 材料 45 5.1.1 菌株和载体 45 5.1.2 主要试剂和仪器 45 5.2 方法 45 5.2.1 定位载体的构建和显微观察 45 5.2.2 膜蛋白基因敲除 46 5.2.3 野生型菌株与缺陷型菌株的生理特性分析 47 5.3 结果 47 5.3.1 定位载体的构建 47 5.3.2 膜蛋白定位 47 5.3.3 膜蛋白基因敲除 48 5.3.4 野生型菌株与缺陷型菌株的生理特性 49 5.4 讨论 51 参考文献 51 攻读学位期间取得的研究成果 53 致 谢 54 个人简况及联系方式 55 承 诺 书 56 学位论文使用授权声明 57 Contents Chinese Abstract I Abstract III Chapter 1 Review 1 The dangers of polychlorinated biphenyls 1 The metabolism of polychlorinated biphenyls by Rhodococcus sp. R04 2 The stress response in Rhodococc