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慢病毒 Cas9 表达系统使用说明 本说明书用于： 构建 Cas9 蛋白表达细胞系 在 Cas9 蛋白表达细胞系中敲除目的基因 适用于以下产品 货号 货号 pLV‐Cas9 载体系列 CR2001，CR2002 pLV‐Cas9‐Nick 载体系列 CR2003，CR2004 pGR 载体系列 CR2011~CR2013 pGR‐EGFP 载体系列 CR2014~CR2016 北京英茂盛业生物科技有限公司 北京市昌平区沙河镇青年创业大厦 B‐916 Tel ：010 Emai：order@ Web site ： 产品说明书 目录 1、产品简介 2 1.1CRISPR/gRNA 基因敲除原理 2 1.2 慢病毒 Cas9 表达系统特点 2 2、Cas9 表达慢病毒制备 3 2.1 试剂准备 3 2.2 简要实验流程 4 2.3 实验前准备 4 2.4 病毒制备步骤 5 2.4 PEG 纯化慢病毒 6 3、筛选 Cas9 表达稳定细胞株 7 3.1 试剂 7 3.2 实验前准备 7 3.3 筛选细胞系实验步骤 8 3.4 Cas9 表达细胞系检测 9 4 、用 pTYNE 载体对 Cas9 表达细胞系进行验证 10 4.1 验证 Cas9 蛋白表达细胞系 10 4.2 验证 Cas9Nicknase 蛋白表达细胞系 11 5、pGR 和 pGR‐EGFP 载体构建 13 5.1 pGR 和 pGR‐EGFP 载体图谱 13 5.2 靶点设计 13 5.3 pGR 载体构建步骤 14 附录 1 用到的产品 17 附录 2 引物列表 17
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