β2肾上腺素受体激动剂克仑特罗对PC12细胞的损伤作用及其机-药理学专业论文.docxVIP

华 中 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 4 PAGE 4 摘要 第一部分 β2肾上腺素受体激动剂克仑特罗对 PC12细胞的损伤作用 目的：采用 PC12细胞观察克仑特罗对其损伤作用。 方法：采用 MTT 比色法检测细胞存活率；LDH 法检测培养液上清 LDH 漏出量；Hoechst33342荧光染色法观察凋亡细胞形态学改变。 结果：（1）β2-AR 激动剂克仑特罗对 PC12细胞的生长具有明显的抑制效 应，该作用可被特异性 β2-AR 阻断剂 ICI 118551所阻断；（2）克仑特罗可 升高 PC12细胞培养液上清 LDH 水平，ICI 118551对其具有抑制作用；（3） Hoechst33342荧光染色法显示克仑特罗可诱导 PC12细胞凋亡，ICI 118551 可减轻克仑特罗诱导细胞凋亡的作用。 结论：克仑特罗可通过激动 β2-AR 对 PC12细胞具有损伤作用。 关键词：克仑特罗；PC12细胞； 阿尔茨海默病 第二部分 NO 信号通路在克仑特罗对 PC12细胞损伤中的作用 目的：探讨 NO 信号转导通路在克仑特罗对 PC12细胞损伤中的作用。 方法：MTT 比色法检测经 NO 阻断剂 L-NAME 处理后的细胞存活率；LDH 试剂盒检测其上清 LDH 漏出量； NO 试剂盒检测其 NO 释放量； AnnexinV-PI 双染色观察其形态学改变；Western Blot 检测 Caspase-3、iNOS 蛋白的表达。 结果：（1）克仑特罗可促进 PC12细胞 NO 合成，伴有 iNOS 表达水平增 加，该作用可被一氧化氮合酶抑制剂 L-NAME 阻断；（2）L-NAME 对克 仑特罗降低细胞存活率及促细胞凋亡具有抑制作用。 结论：NO 信号途径可能参与克仑特罗对 PC12细胞的损伤作用。 关键词：克仑特罗；PC12细胞；凋亡；NO；iNOS 第三部分 ERK1/2信号通路在克仑特罗对 PC12细胞损伤的作用 目的：探讨 ERK1/2信号通路在克仑特罗对 PC12细胞损伤中的作用。 方法：MTT 比色法检测细胞存活率；Western Blot 检测 PC12细胞 ERK 磷 酸化和 Caspase-3蛋白表达水平。 结果：（1）克仑特罗可促进 ERK1/2去磷酸化，给予 MAPK 激酶 MEK1 特异性抑制剂 PD98059可加强其去磷酸化作用；（2）PD98059对克仑特罗 降低细胞生存率以及促进凋亡相关基因 Caspase -3蛋白表达具有协同作 用。 结论 ERK1/2参与克仑特罗对 PC12细胞损的伤作用。 关键词：克仑特罗；PC12细胞；凋亡； ERK1/2 Abstract Alzheimer’s disease (AD) and β2-AR are connected in a way as researchers’reports that is still not completely understood, but it’s known that environmental factors such as acute stress induces abnormal activation of β2-AR affects AD. Here we show an evidence that a selective β2-adrenergic agonist clenbuterol is capable of increasing cytotoxicity on PC12 cell without a dose-dependent manner. By MTT and biochemical assays we demonstrate that clenbuterol impairs PC12 cell which is also shown by using Hoechst staining. Furthermore, we detect that the impairment may via nitric oxide pathway and ERK passway by western blotting which opens a fresh view for the future research. Together, these results may provide opportunities for the design of preventive and therapeutic strategies against AD. 1 1 缩写词(Abbreviation) 英文缩写 英文全称 中文全称 AD Alzheimers dis