β-甘露聚糖酶的生产纯化和性质研究-生物化工专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 A Thesis Submitted for the Application of the Master’s Degree of Engineering Research on the Production, Purification and Characterization of Mannanase Candidate: Shan Xiuhuan Specialt y: Biochemical Engineering Supervisor: Professor Liu Xinli Qilu University of Technology, Jinan, China May, 2014 学位论文独创性声明 本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文 中引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上 已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或 成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说 明并表示谢意。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文知识产权权属声明 本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属齐鲁工业 大学。齐鲁工业大学享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及申请专利 等权利，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，本 人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单 位仍然为齐鲁工业大学。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名： 日期： 年 月 日 齐鲁工业大学硕士学位论文 目录 摘 要 I ABSTRACT I 缩略词表 I 第 1 章 绪 论 1 1.1 自然界中的甘露聚糖和它的应用价值 1 1.1.1 自然界中甘露聚糖的存在形式 1 1.1.2 甘露聚糖的应用价值 2 HYPERLINK \l _TOC_250001 1.2 甘露聚糖的释放与 β-甘露聚糖酶 2 1.2.1 甘露聚糖的释放 2 1.2.2 β-甘露聚糖酶及其来源 3 1.2.3 β-甘露聚糖酶结构和作用机理 4 1.2.4 影响 β-甘露聚糖酶作用效果的因素 5 1.2.5 β-甘露聚糖酶的应用 5 1.3 本课题的目的意义及主要内容 7 HYPERLINK \l _TOC_250000 第 2 章 β-甘露聚糖酶优势菌株的筛选 9 2.1 前言 9 2.2 实验材料 9 2.2.1 菌种来源 9 2.2.2 仪器 10 2.2.3 培养基 10 2.2.4 药品试剂 10 2.3 实验方法 12 2.3.1 菌株的活化 12 2.3.2 刚果红染色法初筛 12 2.3.3 测定酶活方法复筛 12 1 目录 2.4 实验结果 13 2.4.1 刚果红染色法初筛 13 2.4.2 酶活测定法复筛 15 2.5 本章小结 17 第 3 章 枯草芽孢杆菌 S-88 发酵条件优化 19 3.1 引言 19 3.2 实验材料 19 3.2.1 菌种 19 3.2.2 仪器及试剂 19 3.2.3 培养基 20 3.3 实验方法 20 3.3.1 最优碳源的优化 20 3.3.2 最优碳源比例 20 3.3.3 最优氮源 21 3.3.4 氮源经济性评价 21 3.3.5 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis S-88 的生长曲线 21 3.3.6 最优产酶时间 21 3.4 实验结果 22 3.4.1 最优碳源 22 3.4.2 最佳碳源添加比例 22 3.4.3 最优单一氮源 23 3.4.4 氮源经济性评价 24 3.4.5 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis S-88 的生长曲线 25 3.4.6 时间对产酶的影响 25 3.5 本章小结 26 第 4 章 β-甘露聚糖酶的分离纯化 27 4.1 引言 27 4.2 实验材料 27 4.2.1 菌种 27 4.2.2 培养基 27 2 齐鲁工业大学硕士学位论文 4.2.3 仪器及试剂 28 4.3 实验方法 29 4.3.1 粗酶液的制备 29 4.3.2 硫酸铵梯度盐析 30 4.3.3 AKTAEXPLORE ER100 蛋白纯化 30 4.3.4 蛋白分析 31 4.3.5 测定各个组分的酶活和蛋白含量 32 4.4 实验结果 33 4.4.1 硫酸铵盐析 33 AKTA HiprepTM 26/10 脱盐柱脱盐 34 AKTA HiprepTM 26/10 DEAE FF 35 AKTA G-75 凝胶电泳