zkscan3基因敲除小鼠模型的建立与其功能研究-生化与分子生物学专业论文.docxVIP

II II 中文摘要 zkscan3 基因敲除小鼠模型的建立与其功能研究 结果 1． PCR 结果表明 ZKSCAN3-/-基因组中第 2 外显子被敲除 2． RT-PCR 表明 ZKSCAN3-/-有 mRNA 的产生，但是缺失第 2 个外显子 3． 各种基因型的小鼠比例与孟德尔遗传定律相吻合，说明 ZKSCAN3 基因 敲除对小鼠的胚胎发育没有明显影响 4． 不同基因型的小鼠其出生后 D10 至 D40 期间的体重变化无明显差异 5． ZKSCAN3-/-小鼠的各组织器官的 HE 染色结果与其对应的野生型与杂 合型小鼠均无明显差异，仅在脾脏中，有个别敲除小鼠出现疑似含铁血黄素沉积。 6． 不同基因型小鼠的血相分析结果之间无明显差异，不具有统计学意义 7． DiI 标记的红细胞集中在小鼠脾脏的红髓区域，且出现在含铁血黄素样 物质中，说明脾脏的含铁血黄素样沉积是由红细胞的代谢过程异常造成的。 结论： 我们成功鉴定了 ZKSCAN3 基因敲除小鼠模型，在基因组水平上敲除其基因的 第 2 个外显子，在敲除小鼠体内存在缺失第 2 个外显子的 mRNA，是否有相应的 蛋白产物生成还未知。各基因型小鼠的比例正常，说明 ZKSCAN3 缺失并不影响小 鼠胚胎的正常发育过程。小鼠出生后，敲除小鼠的生长曲线与野生型无明显差异， 说明 ZKSCAN3 基因对出生后小鼠的生长没有影响。我们又通过 HE 染色的方法 对小鼠的各组织器官进行检测，并没有发现明显的异常，仅在脾脏背侧发现有含 铁血黄素样物质沉积。对脾脏功能的分析提示我们 ZKSCAN3 可能与小鼠的巨噬细 胞功能相关。但由于该敲除小鼠模型仍有截短的 zkscan3 mRNA 表达，不排除截短 的 zkscan3 基因可能发挥了部分功能，因此我们已启动了基于新敲除策略的完全敲 除型小鼠模型构建，从而能够深入研究其功能。 关键词：ZKSCAN3；基因敲除；发育；含铁血黄素；巨噬细胞； 作 者： 李甲璐 指导老师： 杨 林 III III zkscan3 基因敲除小鼠模型的建立与其功能研究 英文摘要 Knock-out mice model establishment and function analysis of zkscan3 Abstract ZKSCAN3 is a zinc finger protein with KRAB domain and SCAN domain, which locus on chromosome 6p22.1 region in human. ZKSCAN3 contains KRAB, SCAN and C2H2-type zinc finger domain. Among them, the KRAB domain functions as a transcriptional repressor when binds to template DNA, while the SCAN domain may play an important role in assembly and function of C2H2 zinc finger proteins, C2H2 zinc finger domain binds to DNA, RNA, protein and other small molecules, and different zinc finger sequences and links determine the binding specificity of zinc finger proteins. It is showed that ZKSCNA3 binds to KRDGGG motif and up-regulate genes associated with cell growth, migration, angiogenesis and proteolysis, such as MST1R, MEK2, RasGRP2, IGF-2, integrin β4, VEGF, MMP26 and PRSS3. Since these gene products play an important role in the tumor growth progress, ZKSCAN3 may represent a potential target for cancer treatment. Data also shows that, ZKSCAN3 significantly promote the development and metastasis progress of colorectal carcinoma, mul