叶绿体中色素提取和分离实验疑难解析及注意事项.docVIP

叶绿体中色素提取和分离实验疑难解析及注意事项 　　一、“叶绿体中色素的提取和分离” 实验疑难解析 　　 　　1、 滤纸条上的滤液细线为什么不能触到层析液？ 　　滤纸条上的滤液细线如果触到层析液，滤纸条上叶绿体中的色素就会溶解在层析液中，实验就会失败。 　　2、 提取和分离叶绿体中色素的关键是什么？ 　　⑴提取叶绿体中色素的关键是：叶片要新鲜、浓绿；研磨要迅速、充分；滤液收集后，应及时用棉塞将试管口塞紧，避免滤液挥发。 　　⑵分离叶绿体中色素的关键是：滤液细线不仅细、直，而且含有比较多的色素；滤纸条上的滤液细线不能触到层析液。 　　3、 层析时，为什么要盖上培养皿盖？ 　　⑴防止层析液挥发，毒害人体。 　　⑵使滤纸条被层析液蒸汽所饱和，有利于色素的均匀扩散。 　　⑶为滤纸条提供了着生的基点。 　　4、 用丙酮提取的叶绿体色素滤液，对着光源与背着光源观察试管内的提取液，其颜色分别是什么？原因是什么？ 　　对着光源时见到的是绿色。因为色素滤液对着光源，眼睛感知到的是色素液的透射光，由于红橙光和蓝紫光等已被色素吸收，透射出的绝大多数是绿光，因而见到的为绿色。背着光源时见到的是红色。人们将叶绿素在反射光下呈现红色的现象叫做荧光现象。产生荧光现象的原因是：当叶绿素分子吸收光子后，就由最稳定的、最低能量的基态提高到一个不稳定的、高能的激发态，激发态极不稳定，发射光波，消耗能量，迅速由激发态降回到基态，这时发射的光波就称为荧光。荧光的寿命很短，约10－19~10－8秒。因为叶绿素分子吸收的光能有一部分消耗于分子内部的振动，因而辐射出的能量少，根据波长与光子能量成反比的规律，反射光的波长比入射光的波长要长一些，所以叶绿素溶液在入射光下呈绿色，而在反射光下呈红色。叶绿素在溶液中的荧光很强，但是在叶片和叶绿体中却很微弱，难以观察出来。 　　 　　二、“叶绿体中色素的提取和分离”实验注意事项 　　 　　1、“叶绿体中色素的提取”注意事项 　　① 要选取新鲜（含色素多、色素分子没有被破坏）且容易研磨的叶片作实验材料，使研磨匀浆中含有较多的色素。 　　② 研磨过程中加入SiO2是为了研磨充分；加入CaCO3是为了防止叶绿素分子受到破坏。因为细胞液中含有有机酸，叶绿素分子遇到酸容易分解。（拌绿色蔬菜时放入醋后菜变黄就是此原因）。 　　③ 过滤时不能用滤纸，而是用脱脂棉，原因是滤纸能吸附色素，降低滤液中色素的含量，使实验效果不明显。 　　④加入丙酮后要迅速、充分研磨，以防止丙酮挥发，使更多的色素溶解在丙酮中。 　　⑤滤液收集后、应用棉塞将试管口塞紧，避免滤液挥发及色素遇空气氧化。 　　2、“叶绿体中色素的分离”注意事项 　　⑥剪去滤纸条的两端，目的是让层析液在滤纸条上均匀地扩散，得到整齐的色素带。 　　⑦画滤液细线时，在滤液干燥（为什么？）后，重复画2~3次，以便使更多的色素附着在滤纸条上。 　　⑧滤液细线要画得细且齐，否则会出现色素重叠。要使滤液细线细且齐，应做到以下五点：a毛细吸管的管口要细且齐；b画滤液细线时要快且均匀；c必须待滤液细线干燥后再重复；d实验前滤纸条必须干燥；e滤纸条的长度应为10cm左右，太长了浪费，太短了满足不了色素扩散的需求。 　　⑨层析时滤液细线不能插入层析液中，也不能震动，避免层析液没及滤液细线。同时，滤纸条也不能紧靠在烧杯壁上，否则色素溶解于层析液中，使滤纸条上的色素含量过低，观察不到实验效果。 　　⑩实验要尽量在通风处进行。因为实验中接触到的苯和丙酮等有机溶剂是有毒化学药品，因此实验后一定要将手洗干净。 　　 　　三、“叶绿体中色素的提取和分离”相关例题 　　 　　【例1】在进行叶绿体中色素的提取和分离实验时，不能让层析液没及滤液细线的原因是（） 　　A、 滤纸条上几种色素会扩散不均影响实验效果 　　B、 滤液细线会变粗而使色素太分散 　　C、 色素会溶解在层析液中，使实验效果不明显 　　D、 滤纸条上的几种色素会混合起来不分散 　　【解析】C。叶绿体中的色素不溶于水，但能溶于有机溶剂，如酒精、丙酮、苯等，所以可用丙酮作为提取液来提取色素。由于层析液也是有机溶剂，如果层析液没及滤液细线，则滤液细线中的色素就会溶解在层析液中，导致实验效果不明显。 　　【例2】对圆形滤纸中央点上的叶绿体色素滤液进行色素分离，会得到近似同心的四圈色素环，排在最外面的色素是（ ） 　　A、 橙黄色的胡萝卜素 　　B、 黄色的叶黄素 　　C、 蓝绿色的叶绿素a 　　D、 黄绿色的叶绿素b 　　【解析】A。由于四种色素随层析液在滤纸条上的扩散速度不同，在滤纸条上的四种色素由外到内依次是：胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿色）、叶绿素b（黄绿色）。