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miR182基因表达与肺癌相关性研究 　　[摘要] 目的 分析肺癌局部miR-182的表达水平，考察其与肺癌临床特征的相关性。 方法 选取2012年3月～2013年5月在我科住院并行手术治疗的非小细胞肺癌患者62例，分离肿瘤组织并提取miR-182，RTPCR方法检测miR-182的表达水平，分析其肺癌临床病例特征之间的相关性。 结果 miR-182在不同年龄和性别的患者中表达没有差异（P0.05）；miR-182在肺癌组织中的表达与浸润程度、淋巴结转移、远处转移和肿瘤分期具有明显的相关性（P0.01）。腺癌组织表达miR-182高于鳞癌组织，但其增加趋势相同。 结论 肿瘤组织miR-182的表达水平与肺癌临床特征具有一定的关联性，并可用于肺癌的临床诊断，具有较好的临床应用前景。 　　[关键词] miR-182；肺癌；RT-PCR；相关性 　　[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2013）30-0001-02 　　肺癌一直是全球死亡率最高的癌症，而我国居民的肺癌死亡率从20世纪70年代中期到90年代初期增加了1.5倍，是患者数量增长最快的恶性肿瘤[1]。肺癌中80%左右为非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）[2]，临床上一般将鳞形细胞癌、未分化癌、腺癌划分为NSCLC。目前研究报道miR-182在肺癌的发病中发挥了一定的作用，但其机制尚不明确[3]。本文旨在通过检测miR-182在非小细胞肺癌组织和癌旁正常肺组织中的表达，明确miR-182是否可作为非小细胞肺癌的分类分型和预后分析的关键标志物。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验标本 　　选取2012年3月～至2013年5月在我科住院并行手术治疗的非小细胞肺癌患者62例，所有患者术前未做化疗、免疫或放射等抗肿瘤治疗，每例患者均取材包括肿瘤组织及癌旁组织，癌旁组织经HE染色鉴定为正常组织，组织标本离体后 10 min 内于液氮中迅速冷冻后置-80℃保存。每例样本均经过组织病理学诊断证实。 　　62例患者中男41例，女21例，年龄44～78岁，平均（63.3±12.7）岁；肺癌分型主要包括：鳞癌32例，腺癌30例；患者肿瘤分期根据国际抗癌联盟（UICC）的TNM分期[4]。鳞癌和腺癌比较研究中，从鳞癌和腺癌患者中均随机抽取20例患者，两组患者在年龄、性别、癌症程度上均无统计学差异（P0.05）。 　　1.2 试剂 　　miRCute miRNA提取分离试剂盒、Real Master Mix Probe试剂盒（天根公司），5×Reverse Tanscriptase M-MLV Buffer，dNTP Mixture（大连宝生物公司），引物和探针均由上海闪晶公司设计并合成。miR-182、U6上游引物购至上海生工生物工程有限公司。 　　1.3 RT-PCR 　　组织中总 RNA 提取：取-80 ℃ 保存的组织，切成薄片，用液氮研磨法磨成粉末，用天根公司miRCute miRNA 提取分离试剂盒（离心柱型） 按说明书操作提取总 miRNA。用紫外分光光度仪检测RNA 溶液 A260/280 nm比值，计算 RNA 浓度和纯度，取A260/280 nm比值在1.8～2.1者用于进一步实验。逆转录后，加入miR-182或内参U6探针等，置于荧光定量PCR上进行PCR扩增。以 2-△△Ct方法计算miR-182的相对表达量[5]。 　　1.4统计学分析 　　采用SPSS16.0软件包进行，计量资料采用（x±s）表示，两两均数比较采用t检验，多组均数比较用单因素方差分析，P0.05具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 miR-182在肺癌组织中的表达 　　肺癌患者中年龄≥60和年龄0.05）；肺癌男女患者之间miR-182没有统计学差异（P0.05）；miR-182在肺癌组织中的表达与浸润程度、淋巴结转移、远处转移和肿瘤分期具有明显的相关性（P0.01）。见表1。 　　表1 miR-182在肺癌组织中的表达[（x±s），n=62] 　　注：年龄、性别统计采用t检验，浸润程度、淋巴结转移、远处转移和肿瘤分期采用单因素方差分析 　　2.2 miR-182在不同类型肺癌中的表达 　　肺癌腺癌组织中miR-182表达均高于鳞癌组织中表达水平（P0.01），通过肿瘤分期数据发现，伴随肿瘤的恶化，miR-182在两种肿瘤变化趋势基本相同。见表2。 　　表2 miR-182在不同类型肺癌中的表达[（x±s）n=20] 　　注：与鳞癌比较，*P0.5，**P0.01 　　3 讨论 　　MicroRNA（miRNA），即微小RNA，是一种长度约为22个核糖核苷