丙型肝炎实验诊断ppt课件.pptVIP

目前检测方法 抗-HCV and HCV-RNA的检测 ——不能满足临床早期、准确、可靠的要求。 RIBA实验操作复杂、费用较高、推广难 丙肝抗原检测 1、丙型肝炎早期感染诊断指标 2、丙型肝炎确诊指标 3、丙型肝炎治疗评价指标 4、丙型肝炎筛查指标 HCV核心抗原的检测 抗-HCV “游离”抗原 时间 HCV 感染过程 早期检测 “筛查” “总”抗原 (抗体结合) “总”抗原 诊断用 12-14天 年 1 pg/ml 总HCV 核心抗原 = 8000 IU/ml HCV RNA 日 70-80天 感染丙肝病毒后各指标检测时间表 抗-HCV “游离”抗原 早期检测 “筛查” “总”抗原 ■HCV RNA 11~13 days ■ HCV Ag 12~14 days ■ Anti-HCV = 70 days(3rd Gen) = 82 days(2nd Gen) 1 pg/ml 总HCV 核心抗原 = 8000 IU/ml HCV RNA HCV RNA 1 10 20 30 40 50 60 80 90 100 110 120 130 140 150 70 天 时间 灵 敏 度 0 10 20 30 40 50 60 检验原理 通过对血清或血浆样品进行预处理，解离HCV抗原/抗体复合物并释放出所有核心抗原，经固相包被特异性抗体捕获后，再与酶标记抗体形成双抗体夹心复合物，最后加入酶底物显色，以产品规定的可见光波长临界OD值判断HCV抗原检测结果。 HCV抗原ELISA基本原理 HCV抗体 抗 原 抗HCV抗体-HRP HRP 抗HCV体 酶 联 板 样本处理 不同亚型丙型肝炎病毒核心抗原的序列分析 10 20 30 40 50 60 ? HCV 1 MSTNPKPQRK TKRNTNRRPQ DVKFPGGGQI VGGVYLLPRR GPRLGVRATR KTSERSQPRG HCV 1b MSTNPKPQRK TKRNTNRRPQ DVKFPGGGQI VGGVYLLPRR GPRLGVRATR KTSERSQPRG HCV 2a MSTNPKPQRK TKRNTNRRPQ DVKFPGGGQI VGGVYLLPRR GPRLGVRATR KTSERSQPRG HCV 2b MSTNPKPQRK TKRNTNRRPQ DVKFPGGGQI VGGVYLLPRR GPRLGVRATR KTSERSQPRG HCV 3 MSTLPKPQRK TKRNTIRRPQ DVKFPGGGQI VGGVYVLPRR GPRLGVRATR KTSERSQPRG ? ? 70 80 90 100 110 120 HCV 1 RRQPIPKARQ PEGRTWAQPG YPWPLYGNEG CGWAGWLLSP RGSRPSWGPT DPRRRSRNLG HCV 1b RRQPIPKARQ PEGRTWAQPG YPWPLYGNEG MGWAGWLLSP RGSRPSWGPT DPRHRSRNLG HCV 2a RRQPIPKDRQ STGKSWGKPG YPWPLYGNEG CGWAGWLLSP RGSRPTWGPT DPRHRSRNLG HCV 2b RRQPIPKDRQ STGKSWGKPG YPWPLYGNEG LGWAGWLLSP RGSRPSWGPT DPRRRSRNVG HCV 3 RRQPIPKARQ SEGRSWAQPG YPWPLYGNEG CGWAGWLLSP RGSRPSWGPT DPRRRSRNLG ? 130 140 150 160 HCV 1 KVIDTLTCGF ADLMGYIPLV GAPLGGARRA LAHGVRVLED HCV 1b KVIDTLTCGF ADLMGYIPLV GAPLGGARRA LAHGVRVLED HCV 2a KVIDTLTCGF ADLMGYIPVV GAPVGGARRA LAHGVRVLED HCV 2b KVIDTLTCGF ADLMGYIPVV MAPLGGARRA LAHGVRVLED HCV 3 KVIDTLTCGF