SARS幻灯.ppt

中国进出口商品检验技术研究所二OO三年五月 SARS病毒概述 SARS病毒属于“ssRNA positive－strand virus”家系的“Nidovirales”系，是冠状病毒家族中出现的一个新的变体； SARS病毒全长29700多bp，已知有11个编码序列（cds），可能编码11个蛋白质； SARS病毒极易变异，目前已发现14种变异菌株。 国内外研究现状 食品中普通病毒检测方法 经过食品传播的病毒主要是肠道病毒（约120余种） 特点：病毒数量少，需要富集，受食品成份干扰。 检测方法： 细胞培养法：需数天1-200/g，问题：重复性差，或不能重复 ELISA方法：需1000个以上病毒颗粒，问题：不易得到试剂 PCR方法：理论上1个病毒，问题：受食品成分干扰，最低1个PFU 主要试剂和仪器设备 主要试剂 RNA提取试剂、逆转录试剂；TaqDNA聚合酶、dNTP、PCR缓冲液。 主要仪器设备 组织捣碎机，涡旋振荡器，高速离心机， DNA扩增仪，凝胶成像仪，水浴锅。 模拟SARS病毒污染 禽类和水产品：25g组织样品均质后取30ml（含3.75g）均质液，添加1、10、100 TCID50/ml 。 血液：取动物血液10ml（含抗凝剂）,离心，各取100?l加入0.1、1、10、100 TCID50/ml 样品处理及病毒的提取 动物组织和水产品的处理 25g样品 均质 离心 ? 离心 沉淀 取上清 收集病毒 病毒RNA提取 血液样品的处理及病毒的提取 10ml血液样品 离心 添加病毒 ? 提取病毒RNA 影响食品中病毒检测的因素 取样数量 添加的病毒数量TCID50 回收率 简便 －－ 常规实验室设备 灵敏 －－ 在动物组织、水产品和血液样品中的检测灵 敏度参考值分别为160个TCID50、 16个TCID50 和0.1 个TCID50 /克组织 快速－－ 动植物组织9小时，血液6小时得到实验结果 准确－－ 模拟污染样品均得到阳性结果，其它样品检测 结果均为阴性 易推广－－ 简便灵敏、快速准确、操作性强。 适用范围 食品中SARS病毒的检测 动物活体及其产品中SARS病毒的检测 植物及其产品中SARS病毒的检测 食品中SARS病毒检测方法由我所自主设计开发，自行设计完成，填补了该领域的空白； 该方法的建立将有效破除一些国家利用SARS问题对我国出口食品设置的技术壁垒； 该方法的建立将为我国进出口食品的安全检测、预警和控制以及标准体系提供必要的技术支持。 在当前我国SARS疫情蔓延，国外设置技术壁垒阻碍我国食品出口的情况下，该方法的建立具有非常显著的经济价值和政治意义。 总 结 * * * * * * 食品、动植物及其产品中 SARS病毒检测技术 培训班 研究背景 SARS(严重急性呼吸综合症,Severe Acute Respiratory Syndrome)在世界范围内的传播及其很强的传染性； 意大利、西班牙等国利用SARS疫情设置技术壁垒。 临床诊断 国际国内专家正致力于SARS病毒病源学、流行病学、诊断学、分子生物学等研究，并取得了一定的研究成果（免疫荧光法、ELISA法、分子生物学方法）。 食品中的检验 空白。 食品中SARS病毒检测方法 RT－PCR 模拟SARS病毒污染 食品中SARS病毒的富集、提纯 RT－PCR检测 实验材料 禽类产品（鸡肉） 水产品（蛏蛤） 血液（羊血、鸭血、鱼血） 检测样品 墨鱼、鱿鱼、肉馅、猪肝、猪舌、大肠、猪肾、皮皮虾、大米、蔬菜。 动物组织和水产品的处理 血液样品的处理 缓冲液 添加病毒 抗凝剂 cDNA的合