第11章 动物细胞培养基本条件课件.pptVIP

11.1 动物细胞培养基的组成和制备 11.2 影响动物细胞培养的环境因素;11.1 动物细胞培养基的组成和制备;;BSS中试剂规格为GR或AR试剂，用三蒸水配制； 配制后液体桃红色，PH7.4； 避免钙、镁离子沉淀，要单独溶解； 灭菌后丢失水分应补足； 液体出现沉淀应重新配制。;动物细胞的培养基分类： 天然培养基 合成培养基 无血清培养基;（2）胚胎提取液：鸡胚、牛胚提取液，能促进细胞生长。来源有限。不常用。 （3）水解乳白蛋白：是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解后的产物，含丰富氨基酸。用Hanks液配制成0.5%溶液，与合成培养基按比例混合使用。多用于细胞系和原代细胞的培养。 （4）胶原：胶原是从动物真皮或大鼠尾腱中提取的，具改善细胞表面特性促使其附着生长的作用。;11.1.3 合成培养基;合成培养基的组成： （1）氨基酸：氨基酸是细胞合成蛋白质的基本成分， 12种必须氨基酸必须由培养液提供。需加一定量的谷氨酰胺。 （2）维生素：包括水溶性和脂溶性两类。一般由血清供应。 （3）无机离子：包括大量和微量无机离子，通常也可由血清提供。 （4）碳源：以葡萄糖为主。 （5）其他：嘌呤、嘧啶、辅酶及抗氧化剂等。; 动物血清成分复杂，各种生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚，后期对培养产物的分离、提纯以及检测会造成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限，成本高，限制了它的大量使用。 ; 无血清培养基不加动物血清，一般由基础培养基和替代血清的补充成分（细胞生长有效因子，激素等）两部分组成。 可保证实验结果的准确性和稳定性。但成本较高，针对性较强，一种无血清培养基只适用于某一类细胞的培养。;（1）基础培养基 根据不同培养细胞选择合适的合成培养基作为基础培养基。常用DMEM和F12以1：1比例混合作为基础培养基，用NaHCO3或HEPES溶液调整PH。;（2）补充成分 激素和生长因子：激素有胰岛素、生长激素和多种生长因子如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、增殖刺激因子、类胰岛素生长因子等。主要是刺激生长，维持细胞功能的作用。 结合蛋白：主要是转铁蛋白（增强细胞摄取培养基中铁的能力，可螯???痕量有害金属离子）和白蛋白（参与运载一些脂类、金属离子等，也有螯合过量微量元素的作用）两种蛋白。 ;贴壁和铺展因子：帮助细胞贴壁和铺展。如纤黏蛋白、血清铺展因子、胶原等。 微量元素和低分子量营养因子：硒元素、丁二胺、亚油酸等。 酶抑制剂：常用大豆胰酶抑制剂。;;11.2 影响动物细胞培养的环境因素;思考题