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紫外-可见分光光度法在生物分析中的应用 摘要：在仪器分析中，紫外-可见分光光度法是历史悠久、应用最为广泛的一种光学分析方法。本文对紫外-可见分光光度法的原理进行了阐述，并对其在各个方面的应用当中涉及的生物分析的应用做了归纳和总结。 关键词：紫外可见分光光度法；原理；应用 紫外-可见分光光度计既是一种历史悠久、传统的分析仪器，又是一种现代化的集光、机、电、计算机为一体的高技术产品，它的应用非常广泛，在有机化学、生物化学、药品分析、食品检验、医疗卫生、环境保护、生命科学等各个领域和科研生产工作中都已得到了极其广泛的应用，特别在生命科学突飞猛进的今天，紫外可见分光光度计又是生命科学的眼睛，它已被国内外许多专家学者认定为生命科学仪器中的主干产品之一。可以预言，紫外可见分光光度计将有巨大的市场潜力和经济效益，他将为人类的生活、生存、发展和生态平衡提供有力的保障。 1.紫外-可见分光光度法在食品分析中的应用 1.1 紫外分光光度法测定蛋白质的含量 蛋白质与生命的起源、存在和进化都密切相关，蛋白质测定涉及到生产和科研的众多领域。紫外分光光度法进行蛋白质含量的测定法简单、迅速，且相对较为准确，是测定低浓度蛋白质含量的有效方法。 近年来，随着基因工程学、分子生物学和现代分离技术的快速发展，蛋白质已成为一项质量和资源评价的指标。蛋白质是构成生物体细胞组织的重要成分。食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源，具有糖类和脂肪不可替代的作用 。蛋白质营养代谢、细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、物质运转、遗传等密切相关，其分离与定性、定量分析是生物化学和其它生物学科、食品检验、临床检验、诊断疾病、生物药物分离提纯化和质量检验中最重要的工作。蛋白质含量测定法是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有五种方法，即定氮法，双缩脲法(Biuret 法)、Folin－酚试剂法(Lowry 法)、 光吸收值与蛋白质浓度的正比关系，可进行蛋白质含量的测定。 前四种方法难以进大批样品检验，故不利于基层推广，紫外分析法简便、灵敏、快速、不消耗样品，测定后仍能回收利用，低浓度的盐和大多数缓冲液不干扰测定，有利于基层推广。 紫外吸收法简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后仍能回收使用。低浓度的盐，例如生化制备中常用的(NH4)2SO4 等和大多数缓冲液不干扰测定。特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测，因为此时只需测定蛋白质浓度的变化，而不需知道其 绝对值。此法测定蛋白质的浓度范围为0.1～1.0 mg/mL。通过本次实验我们可以看出在浓度测定范围内和排除干扰，实验数据的稳定性、重现性、精确度都是很好的，所以紫外吸收法很适合基层单位的推广。 1.2 酸奶中维生素A的测定 酸奶是一种发酵奶制品，由于其丰富的营养成分以及独特的风味、口感而深受人们的喜爱。酸奶中含有一定量的维生素A，作为人体必需的营养元素，分析测定维生素A的含量具有重要的意义。王明华等采用紫外分光光度法分析测定酸奶中维生素A的含量，实验结果表明，维生素D的存在不影响维生素A的测定结果。该方法与三氯化锑比色法相比，操作简便、安全。 1.3 番茄红素的测定 番茄红素是一种具有多种生理功能的类胡萝卜素，通常状况下与其他类胡卜素同时存在于多种生物体中。张连富等从番茄红素及β-胡萝卜素的紫外吸收光谱的差异入手，确定了以质量分数2%二氯甲烷为溶剂、以502nm吸收峰为检测波长的番茄红素测定方法，避免了其他类胡萝卜素的干扰，并将其转化为用消光系数来计算的形式，避免了番茄红素标准样品的制约。溶液中番茄红素的质量浓度在0.0017μg/mL～3.12μg/mL范围内时，该检测方法的可信度在90%以上。 1.4 大豆总异黄酮含量的测定 大豆异黄酮是一类从大豆中分离提取的主要活性成分，具有异黄酮类化合物的典型结构。生物活性研究表明，大豆异黄酮特别是其中的金雀异黄素和大豆素，具有抗氧化、抗肿瘤、改善心血管功能、抗骨质疏松等功效。张玉梅等以大豆中的活性成分金雀异黄素为标准品，在其紫外最大吸收峰259nm处测定大孔吸附树脂法配合溶剂法提取制得的大豆异黄酮试样的含量，方法简便，重现性好，可作为检测大豆异黄酮含量的一种手段。 1.5 发酵食品中黄曲霉毒素含量的测定 黄曲霉毒素是以发霉粮食为原料或曲种的发酵食品中产生的一种强致癌毒物，简称AFT。干信等用紫外分光光度法测定粮、油和发酵食品中的黄曲霉毒素，通过加标回收及质控样品测定，证明本法准确可靠，具有灵敏、快速、经济的 优点。 在紫外区进行食品中某些指标的分光光度法测定，因其简便、快捷、有效而在食品分析中占有很大比重。在今后几年内，这种局面仍将维持下去。在可见区，因其灵敏度高、选择性好、方法灵活、适用面宽而受到越来越多的青睐。随着分析试剂的发展，尤其是具有识别能力的特效显色剂以及金属离子显色剂