凋亡抑制蛋白基因dsRNA转基因烟草表达载体构建.docVIP

凋亡抑制蛋白基因dsRNA转基因烟草表达载体构建 　　摘　　　　要：为了利用RNA干扰技术防治烟粉虱，需要构建凋亡抑制蛋白（IAP）基因dsRNA转基因烟草表达载体。利用PCR技术扩增烟粉虱IAP基因，将其连接到pMD18-T载体中，用BglⅡ、XhoⅠ和BamHⅠ、SalⅠ分别酶切，将获得的片段分别反向、正向连接至pUC-RNAi载体，用PstⅠ酶切pUC-RNAi-IAP，回收酶切片段，将其连接到表达载体pCAMBIA-2300-35S中，并进行酶切验证。IAP　dsRNA转基因烟草表达载体的成功构建为下一步转基因烟草防治烟粉虱的研究奠定基础。 　　关键词：凋亡抑制蛋白；dsRNA；转基因烟草；RNA干扰；烟粉虱 　　中图分类号：Q782　　　　　　　　　　　　　　文献标识码：A　　　　　　　　DOI编码：10.3969/j.issn.1006－6500.2013.01.002 　　Construction　of　Transgenic　Tobacco　Plant　Vector　for　Inhibitor　of　Apoptosis　Protein　Gene　dsRNA 　　GUO　Qiang，　CHU　Dong，　FAN　Zhong-xue 　　（Shandong　Provincial　Key　Laboratory　of　Crop　Genetic　Improvement，　Ecology　and　Physiology，　High-tech　Research　Center，　Shandong　Academy　of　Agricultural　Sciences，　Jinan，　Shandong　250100，China） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：　　To　contol　Bemisia　tabaci　by　RNAi，　transgenic　tobacco　plant　vector　for　inhibitor　of　apoptosis　protein　（IAP）　gene　dsRNA　should　be　constructed.　In　this　study，　we　amplified　the　IAP　gene　of　Bemisia　tabaci　by　PCR，　inserted　it　into　pMD18-T，　digested　with　BglII/XhoI　or　BamHI/SalI　respectively，　conducted　the　acquired　fragments　to　pUC-RNAi　vector，　digested　with　PstI，　and　cloned　into　the　vector　pCAMBIA-2300-35S.　Transgenic　tobacco　plant　vector　was　confirmed　by　PstI　digesting.　The　construction　of　transgenic　tobacco　plant　vector　for　IAP　dsRNA　would　lay　the　foundation　for　the　following　study　of　pest　control. 　　Key　words：　inhibitor　of　apoptosis　protein；　dsRNA；　transgenic　tobacco　plant；　RNA　interference；　Bemisia　tabaci 　　烟粉虱Bemisia　tabaci（Gennadius）广泛分布于全球除南极洲外的各大洲，是热带、亚热带及相邻温带地区棉花、蔬菜和园林花卉等植物及大田作物的主要害虫之一[1]。它不仅取食寄主植物汁液，而且能够传播100多种病毒，分泌大量蜜露诱发煤污病影响光合作用[2-3]。烟粉虱也是科技界有史以来唯一被冠以“超级害虫”（superbug）的昆虫，近20年来给许多国家的农业造成严重的经济损失。烟粉虱在我国广大地区已暴发成灾并造成严重危害，近年来烟粉虱传播的双生病毒在山东、浙江、江苏等地区给番茄等蔬菜造成毁灭性的危害[4]。现在控制烟粉虱的主要手段为化学防治。化学农药的大量使用，不仅导致农药残留，破坏了环境与生态系统平衡，而且导致烟粉虱抗药性逐年增强。目前，传统的烟粉虱防治策略难以满足农业生产的需要，急需新的防控手段。 　　RNA干扰（RNA　interference，RNAi）是由与靶基因序列同源的双链RNA（dsRNA）介导的特异性基因表达沉默现象，是生物的一种古老并且进化上高度保守的基因表达调节机制。Fire等[5]（1998）首次发现将dsRNA注入线虫Caenorhabditis　elegans可以导致同源基因的mRNA降解，从而导致转录后基因沉默，并将这种由dsRNA引发的