保健食品中9种脂溶性维生素的测定（BJS 201717）.docVIP

附件5 保健食品中9种脂溶性维生素的测定 BJS 201717 1范围 本方法规定了营养素补充剂类保健食品中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素含量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本方法适用于营养素补充剂类保健食品中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素含量的测定。 2原理 试样经混合溶液（异丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80，v:v:v）提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。 3试剂和材料 除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1甲醇：质谱级。 3.1.2乙腈：质谱级。 3.1.3异丙醇：色谱纯。 3.1.4丙酮。 3.1.5二氯甲烷。 3.1.6提取溶液（异丙醇：二氯甲烷：甲醇=10:10:80，v:v:v）：取异丙醇50mL、二氯甲烷50mL，用甲醇稀释至500 mL，混匀。 3.1.7 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1 mL用水稀释至1 000 mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。 3.1.8 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1 mL用甲醇稀释至1000mL，用滤膜（3.4）过滤后备用。 3.2标准品 维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K1、维生素K2、β-胡萝卜素标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。 3.3标准溶液配制 3.3.1标准储备液（100μg/mL） 3.3.1.1维生素K1标准储备液：称取0.01 g（精确至0.000 1 g）的维生素K1标准品（3.2），加入5mL丙酮（3.1.4）溶解，用甲醇转移并定容于100 mL棕色容量瓶中。 3.3.1.2 β-胡萝卜素标准储备液：称取β-胡萝卜素标准品（3.2）0.01 g（精确至0.000 1 g），用二氯甲烷（3.1.5）溶解，转移并定容至100 mL棕色容量瓶中。 3.3.1.3维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K2标准储备溶液：分别称取0.01 g（精确至0.000 1 g）的维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素D3、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K2标准品（3.2），用甲醇溶解，转移并定容至100 mL棕色容量瓶中。 3.3.2 空白基质溶液的配制 取空白试样按照试样制备方法 (5.)操作。 3.3.3基质标准工配制 准确吸取标准储备液（3.3.1）适量，用空白基质溶液稀释。此溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素D2含量为0.01 μg/mL、0.02 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.5 μg/mL，维生素D3含量为0.02μg/mL、0.05 μg/mL、0.1μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL，维生素E、维生素E醋酸酯含量为0.1μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、5μg/mL、10μg/mL，维生素K1、维生素K2含量为0.005 μg/mL、0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.25 μg/mL，β-胡萝卜素含量为0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、2.5 μg/mL，临用时配制。 注：操作过程应在避光环境下进行。 3.4微孔滤膜：0.22 μm，有机相。 4仪器和设备 4.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配有大气压化学离子源。 4.2 超声波清洗器。 4.3分析天平：感量分别为0.01 g和0.000 1 g。 5分析步骤 5.1 试样制备 将20粒片剂或胶囊试样粉碎混匀，液体试样混合均匀。 5.2 试样提取 准确称取混合均匀的试样2g（精确至0.01 g）于50 mL棕色容量瓶中，加入40 mL提取溶液（3.1.6），超声20 min，冷却至室温，用提取溶液（3.1.6）定容至刻度，摇匀，上清液经微孔滤膜（3.4）过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。 注：操作过程应在避光环境下进行。 5.3 仪器参考条件 5.3.1 色谱条件 a）色谱柱： C18柱，1.7 μm，100 mm×2.1 mm（内径），或性能相当者。 b）流动相：A 为0.1%甲酸水溶液（3.1.7），B为0.1%甲酸甲醇溶液（3.1.8），洗脱梯度见表1。 c）流速：0.5 mL/min。 d）柱温：35。 e）进样量：5 μL。 表1 洗脱梯度 时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 15 85 3 0 100 8.5 0 100 8.51 15 85 1