盐度胁迫对黄鳍鲷抗氧化酶与ATP酶影响的研究技术总结.pptVIP

“盐度胁迫对黄鳍鲷抗氧化酶和ATP酶影响的研究”项目技术总结 2013年8月5日 ATP酶是一类分布广泛的膜结合蛋白酶，其中Na+/K+-ATP酶在Na+/K+泵中发挥重要作用，参与细胞内外Na+与K+的主动跨膜转运，维持细胞内高K+、细胞外高Na+的离子浓度梯度；而Ca2 +/Mg2 +-ATP酶是将细胞内Ca2+泵出细胞外，维持细胞内低Ca2+水平。在养殖水体盐度发生变化的过程中，鳃和肾脏的ATP酶维持细胞内外渗透压平衡，可以作为离子转运能力的生物学指标。鱼类体内的的抗氧化系统是生物体抵御环境胁迫的第一道屏障，盐度胁迫鱼类的抗氧化酶活力。目前己有研究表明，盐度胁迫能引起鱼类鳃和肾脏的ATP酶和肝脏抗氧化酶活力变化。盐度胁迫对鳃和肾脏ATP酶和肝脏抗氧化酶活力的影响可作为盐度对鱼体健康影响程度的指标。 黄鳍鲷(Sparus latus )属鲷科（Sparidae），鲷属(Sparus)，广泛分布于红海、阿拉伯海、印度洋、西太平洋沿岸，我国东南沿海均有分布。黄鳍鲷生活于近岸海域及河口湾，杂食性，是一种重要的经济鱼类。国内外学者在黄鳍鲷的消化酶、配合饲料以及病害等方面进行了大量的研究。但盐度变化对黄鳍鲷幼鱼鳃和肾脏ATP酶及肝脏抗氧化酶活力影响的研究未见报道。为了分析黄鳍鲷对盐度变化的适应能力，探讨盐度变化对黄鳍鲷胁迫的程度，同时也为黄鳍鲷的淡化及半咸水养殖提供一些基础资料，本项目开展了不同盐度对黄鳍鲷幼鱼的存活率、鳃和肾脏Na+/K+、Ca2+/Mg2+-ATP酶及肝脏超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力影响的研究。 1 材料与方法 1.1实验材料 黄鳍鲷幼鱼购自福建诏安沿海，在实验环境中采用自然海水(盐度20)养殖28d后，随机挑选健康、体表无受伤、个体大小均匀的幼鱼用于实验研究，用于鳃ATP酶和肝脏抗氧化酶活力实验的幼鱼全长36±3mm，体重0.59±0.15g，用于肾脏ATP酶实验的幼鱼全长113±10mm，体重36.70±3.25g。采用140 L红色塑料桶作为实验容器。实验用水为砂滤天然海水与曝气自来水按比例配制的不同盐度的海水。连续充气，每天换等盐度海水一次，水温18±1℃。实验期间，分别于8:00和17:00投喂饲料，取样前22h停止投喂。各组实验开始前进行生化测定，在测定的指标没有显著差异时开始实验。 1.2 实验方法 设4个实验组，其中以自然海水组（盐度20)为对照组，再设盐度分别为15、10、5和淡水的4个处理组，每组3个平行，每平行放养30尾鱼，起始为自然海水养殖。根据预实验结果，盐度15由自然海水直接过渡并计时。盐度10、5和淡水过渡过程为：采用逐级降低盐度的方法，设置每48h降低一级（盐度由20→10→5→淡水共4级），按淡水、5、10的顺序，每组间隔48h，按48 h盐度下降一级的速度分别将盐度降至淡水、5和10，当达到各组相对应的盐度时开始计时，当各组分别实验至24、48、72、96和120h 时，各组随机抽取6尾幼鱼用于生化测定。因淡水组在实验开始计时的24h内有死亡，所以增设在盐度5中停留120h后过渡到淡水的实验组。 1.3 酶活力测定 用MS222 (200 mg/ L) 将黄鳍鲷幼鱼麻醉后，将实验鱼置于冰盘上解剖，取出鳃、肝脏和肾脏后，用预冷0.9 % 生理盐水快速冲洗，并用吸水纸小心吸干。测定前先在冰盘内将样品剪碎，各组样品分别加入9倍体积(W/V)预冷生理盐水，在玻璃匀浆器中匀浆，于Biofuge Stratos冷冻离心机4℃、2500r·min-1离心10min。根据需要，将上清液稀释后作酶活力及总蛋白测定。 酶活力采用南京建成试剂盒检测，相应操作参照说明书进行。Na+/K+、Ca2+/Mg2+-ATP酶活力采用比色法，活力单位定义为每小时在含有1毫克蛋白的组织中ATP酶参与分解ATP产生1μmol无机磷的量为1个酶活力单位，即微摩尔分子磷/毫克蛋白·小时[μmol Pi/(mg prot·h)]，SOD活力按黄嘌呤氧化酶法，活力单位定义为每毫克组织蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50 %时所对应的SOD量为1个SOD活力单位(U)，CAT活力采用比色法，活力单位定义为每分钟分解1μmol 的过氧化氢即为1个酶活力单位(U) (南京建成试剂盒)。 1.4 数据分析与统计方法 生化测定所得数据采用SPSS13.0统计软件包中的一元方差分析(One-way analysis of variance)和Duncan法进行多重比较，分析各实验组与对照组之间及同一组不同时间相邻两组间的差异，P0.05为差异显著，所有的数据均以平均值±标准误差(Mean ±S.D)来表示。 2 结果与分析 2.1盐度对黄鳍鲷幼鱼存活的影响 盐度15、10和5组在120 h的