临床微微生物标本的采集注意事项接种及涂片染色课件PPT课件.ppt

微生物标本的采集、接种及涂片染色 湖南省第二人民医院检验科 黄露萍 一、标本采集和运送 标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的环节 但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己完成，所以也是最不容易做好的事情，而且不知道问题所在之处，造成的后果是：阳性率低、标本污染（临床最不能接受的问题） （一）痰标本的采集 1、标本采集时间：用抗生素前 2、标本采集方法： 2.1 吸痰：通过气管切口直接将痰吸出，只适用于气管切开患者。 2.2 双套管毛刷防污染吸痰（PSB）：这是最好、最科学的取样方法，但缺点是有创伤性检查，病人不易接受。 2.3 肺泡灌洗液：对肺心病、呼衰病人有一定的危险。 2.4 咳痰：是最简单的方法，但污染严重，影响结果判断。 （二）泌尿标本的采集 1、采集后的标本应立即送检。 2、采集时间：多数药物从尿道排泄，所以不管用哪种方法都应在用药前采集。应采集早晨第一次的尿。 3、标本管不应含防腐剂和消毒剂。 4、采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的外阴和男性的外生殖器包括包皮内，然后用清水冲洗。 5、长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取尿标本。 （三）分泌物的采集 1、对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭子采集病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。 （三）分泌物的采集 2、闭锁性脓肿：如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿、盆腔脓肿等，对封闭的脓肿常采用穿刺或引流的的方法采样，应在用药前采集，应注意脓液的气味、性状、颜色注意厌氧菌存在的可能。不能及时送检应运用输送培养基。 （四）便标本的采集 1、采集时间：腹泻患者应在用药前、急性期采集；沙门菌感染、肠热症应在2周内采；厌氧菌出现症状即采集。 2、采集方法：自然排便者可用小木棒挑取有脓血和黏液的部位的粪便2-3克，如液状粪便取絮状物盛于无菌的、密封的、不吸水的、容器内或直接盛于增菌液或保存液中；对不易获得粪便患者及幼儿，可用直肠拭子采集后置保存液或输送培养基中送检。 （五）血液及骨髓标本的采集 4、采血间隔：如第一次采集2套（4瓶）血培养标本，在以后的2-5天不必采血，但除外心内膜炎和导管相关性败血症。 5、儿童：采血量是总血量的1%。 6、延迟培养瓶处理: 延迟培养瓶不要放冰箱或孵箱，放常温，尽早送往临床细菌室。 7、皮肤消毒液推荐：建议先用70-80%异丙醇去脂，再用葡萄糖酸氯乙定消毒。 关于夜班血培养的送检 培养瓶夜班未能及时送到检验科，存在室温即可，不能冷藏也不能放入35 ℃的温箱 。过夜不会对检测造成影响，但仍需尽快送检。冷藏可能导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。温箱会导致细菌进入生长对数期，从而错过检测的最佳时期。 血标本采集间隔时间 对于非持续性菌血症，同时或短时间内采集2－3套血培养，因为体内巨噬细胞吞噬系统会在15～30min内清除掉进入人体内的细菌。 可疑急性心内膜炎患者要立即取血作血培养，30分钟内完成3套血培养的采集，采集后立即进行抗菌药的经验治疗。如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。 血标本采集间隔时间 可疑的亚急性心内膜炎患者每间隔30分钟至1h采集1套，连续采集3套标本。如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。 抽血量和体重的关系 脑脊液标本的采集 无菌操作，由医生腰椎穿刺采样 最少1 mL，最好5 mL 打入3个小管中，以第一根小管送检培养 即时送检，一般不能超过1小时。 绝对不能冷藏！ 二、样本拒收标准 1、样本上无病患标签或病患标签与检验申请单 不符合。 2、样本以不适当的温度、运送培养基及容器 送。 3、样本的量不足、已被防腐剂固定和运送时间 过长。 4、样本外漏、容器破损及明显受污染的样本。 5、样本的检验项目申请不适合进行。 二、样本拒收标准 6、当日重复送样本（除血液培养外）。 7、痰标本涂片，白细胞10，上皮细胞 25。 8、尿液标本培养，标本量太少（少于 10ml）。 9、粪标本培养，放置时间过长，已干。  三、分离培养基本操作规范 合格的标本是保证培养成功的重要条件，但如果没有适宜的分离培养基、培养环境以及正确的处理方法同样不能获得好的结果，为此制定如下基本操作规范以保证致病细菌分离成功。 （一）平板的划线分离方法 1、分区划线分离法 图 示 2、连续划线分离法 3、Maki 滚动法 （二）正确的培养基放置方法 1、加盖、倒置（底朝上） 3、放置于合适的培养环境 2、不可叠加太高（不超过4个） （三）各