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　 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 质粒 目的基因 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 表达载体 同一种 1.过程 DNA聚合酶 DNA连接酶 区别1 区别2 相同点 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段（引物）上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 DNA连接酶的种类 作用 将外源基因送入受体细胞。 常用的运载体 质粒 噬菌体 动植物病毒等 基因的运输工具——运载体 ① 质粒 本质：独立于拟核或细胞核之外的小型双链环状DNA 分布：许多细菌、酵母菌等生物 特点：能自主复制、有限制酶切割位点和标记基因 ② 最常用：大肠杆菌质粒 常用的载体：质粒 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别 课本知识回顾 基因工程又叫做 或 。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加 以 ，然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。 基因拼接技术 DNA重组技术 基因 修饰改造 定向地 “分子手术刀” ── “分子缝合针” ── “分子运输车” ── 限制酶 DNA连接酶 基因进入受体细胞的载体 DNA连接酶 1、种类： 2、作用部位： 两类 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 1．下列关于限制性核酸内切酶的叙述中，错误的是（ ） A ．它能在特殊位点切割DNA分子 B ．同一种酶切割不同的DNA产生的黏性末端能够很好 地进行碱基配对 C ．它能任意切割DNA，从而产生大量DNA片段 D ．每一种限制性核酸内切酶只能识别特定的核苷酸序列 √ 练 一练 2．在基因工程中，切割质粒和含有目的基因的DNA片段，需要使用 （ ） A ．同种限制性核酸内切酶 B ．两种限制性核酸内切酶 C ．同种DNA连接酶 D ．两种DNA连接酶 √ 练 一练 3．DNA连接酶的作用是（ ） A ．使DNA子链和母链之间形成氢键 B ．使黏性末端之间形成氢键而相连 C ．连接DNA分子中脱氧核苷酸和磷酸之间的化学键 D ．以上都不对 √ 练 一练 4 下列关于基因工程的叙述，不正确的是（ ） A、基因工程的原理是基因重组 B、运用基因工程技术，可使生物发生定向变异 C、一种生物的基因转接到另一种生物的DNA分子上 D、是非同源染色体上非等位基因的自由组合 练习 D 3.限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是一G↓GATCC一， 限制性核酸内切酶Ⅱ的识别序列和切点是一↓GATC一。在 质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶 Ⅱ的切点。 ⑴请画出质粒被限制性核酸内切酶I切割后所形成的黏性 末端。 ⑵请画出目的基因两侧被限制性核酸内切酶Ⅱ切割后所形 成的黏性末端。 已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因，现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么？请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论。 对照组：不添加抗生素 实验组1：添加一定浓度的四环素 实验组2：添加一定浓度的氨苄青霉素 实验组3：添加一定浓度的四环素和氨苄青霉素 练习 对照组 实验组1 实验组2 实验组3 结 论 预期一 ＋ ＋ ＋ ＋ 预期二 ＋ ＋ － － 预期三 ＋ － ＋ － 预期四 ＋ － － － 对照组：不添加抗生素 实验组1：添加一定浓度的四环素 实验组2：添加一定浓度的氨苄青霉素 实验组3：添加一定浓度的四环素和氨苄青霉素 既含有抗四环素基因也含有抗氨苄青霉素基因 只含有抗四环素基因 只含有抗氨苄青霉素基因 既不含有抗四环素基因也不含有抗氨苄青霉素基因 什么是基因工程? 基因操作的工具酶主要有哪几种? 基因的剪刀是什么? 其主要作用是什么? 基因的针线是什么? 其主要作用是什么?