第11章 生物素-亲合素放大技术PPT.ppt

第十章 生物素-亲合素放大技术;维生素H 动、植物组织中广泛 分布,卵黄和肝含量高 MW 244.31kD.;一、活化生物素 ;生物素活化;活化生物素;标记蛋白质巯基的活化生物素;标记核酸的活化生物素;生物素脱氧核苷三磷酸（Bio-dUTP） 作为TTP的结构类似物，可采用缺口移 位法掺入到双链DNA中。;活化生物素通过侧链与蛋白分子连接； 一个蛋白分子可被多个生物素标记－多价性； 对BNHS多标记抗体, BHZ则多标记微酸性抗原； 抗原、抗体标记后活性不变； 可对标记材料（如酶）标记：碱性磷酸酶标记后 活性将降低；;选择活化生物素：依抗原或抗体分子所带可标记基团 的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性； 控制生物素：蛋白质比例 生物素：IgG 用量比(mg/mg)宜为2:1, IgG应用浓度 0.5~5μg/ml; 生物素1~3个/Ag，3~5个/Ab； 使用交联臂减少空间阻力;第二节 亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记; 结构 四亚基糖蛋白 四肽链蛋白 无糖基 PI 10.5 6 结合位 色氨酸 色氨酸 生物素 4 4 Ka 1015 1015 活性 13～15 15～18;二、亲合素/链霉亲合素标记;第三节 生物素-亲合素系统的特点;第四节 生物素-亲合素系统的应用;一、生物素-亲合素系统基本类型及原理;BA法 Ag+B·Ab Ag-Ab·B A·E Ag-Ab·B-A-B·E 特点：以A-E/SA-E代替BAB法中的A，省 却了加B-E的步骤 ;3. ;二、生物素-亲合素系统在酶免疫测定中的应用;三、生物素-亲合素系统在荧光免疫技术中的应用;四、生物素-亲合素系统在放射免疫测定中的应用;五、生物素-亲合素系统在分子生物学中的应用;小 结;在生物素—亲合素（链霉亲合素）放大系统应用中，无论采用酶、荧光素或发光物作为检测示踪剂，均是待测抗原与生物素化抗体反应形成复合物后，再利用生物素与亲合素间的多价放大结合特性，或直接与标有示踪剂的生物素结合（BA、LAB法），或依次与亲合素（链霉亲合素）、生物素示踪标记物反应连接成聚合物（BAB、ABC法），最终使待测反应信号被放大，提高检测方法的灵敏度。