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T-SPOT.TB T-SPOT.TB是以特异性抗原为刺激源，应用酶联免疫斑点技术(enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT)诊断结核感染的新方法。 结核感染后机体的免疫应答 结核杆菌?巨噬细胞吞噬-?巨噬细胞凋亡-?释放特异性抗原 -? cD4-? r干扰素-?激活巨噬细胞 -?CD8-?r干扰素、TNF等，释放颗粒酶和穿孔素溶解感染细胞，同时启动Fas途径发挥其溶细胞作用 Behr等应用基因芯片技术将结核分枝杆菌标准株H37Rv和BCG的全基因组进行比较 129个只存在于结核分枝杆菌而在BCG中缺失的开放读码框 这些在BCG中缺失的部分被划分为16个区域（RDl一RDl6） RDl包含9个开放读码框，被证实在所有的卡介苗菌株中均不存在，因此最具有编码特异性抗原的潜质 Lalvani建立了以RDl编码的结核特异性抗原6 kD早期分泌靶向抗原(earlysecreting antigen target·6，ESAT-6)和10 kD培养滤过蛋白(culture filtrate protein-10，CFP-10)肽段库为刺激原，检测外周血中结核特异性释放Y干扰素的T淋巴细胞 。 敏感性与特异性评价 活动性结核与潜伏性的鉴别 结核发病风险的预测 敏感性 Pai等对近3年的13项研究进行Meta分析，共纳入726例受试者，大多为结核培养阳性、HIV阴性的成年人，分析表明T.SPOT.BT的综合敏感性为90％。 Chapman等研究显示39例HIV阳性的结核患者中T.SPOT.TB的敏感性为90％，而PPD皮试的阳性率仅为72％。 -?细胞免疫低下不影响其敏感性 敏感性 Liebeschuetz等报道了对293例怀疑结核的非洲儿童的随访结果，这些儿童的平均年龄为3岁，约46％HIV阳性，多数合并营养不良，对于确诊结核或高度怀疑结核的病例，T-SPOT·TB的阳性率为83％，PPD皮试的阳性率为63％. -?年龄、HIV感染状态和营养不良的严重程度对T.SPOT-TB结果无影响，但均能导致PPD皮试结果的显著差异 敏感性 Nieol等对243例可疑结核的婴幼儿的研究，这些婴幼儿平均年龄为18个月。在经痰或胃灌洗液结核菌培养阳性确诊的病例中，T.SPOT-TB的阳性率仅为50％，而年龄大于12个月的幼儿与12个月之内的婴儿相比，前者阳性率明显增高. -?婴儿中诊断结核感染会降低T．SPOT—TB的敏感性。 敏感性 Kim等随诊72例怀疑肺外结核患者的前赡性研究显示，对于活动性肺外结核，T.SPOT-BT和PPD的敏感性分别为94％和47％，二者比较差异具有显著性(P0．001)。47％的随诊对象合并有导致免疫低下的情况,包括HIV感染、肿瘤、移植、糖尿病以及自身免疫病等，可能是导致PPD皮试的阳性率显著降低的原因。 -?肺外结核诊断的敏感性高 特异性 Pai等的Meta分析中纳人了6项研究290名受试者，其中5项中的受试者都常规地接受BCG免疫。93％为无结核接触史的健康成年人，其综合特异性为93％。 活动性与潜伏性 每一个斑点代表一个与相应抗原反应的单个细胞 活动性与潜伏性 hee等对230例培养阳性活动性结核患者和183例结核接触者进行了T.SPOT.TB检测 在ESAT一6肽段库中，活动性结核患者与结核接触者的SFCs数分别为108vs40 SFCs／106PBMCs(P0．001) 在CFP.10肽段库中，分别为148vs52 SFCs／106PBMCs(P0．001) 两者重叠区域较大。 T.SPOT.TB难以区分活动性结核和潜伏性结核感染。 (1)潜伏性结核感染者的免疫功能良好，少量的抗原刺激就激发出活跃的保护性免疫； (2)活动性结核患者免疫功能低下，大量的抗原刺激也不足以激起有效的细胞免疫。 结核发病风险的预测 Bakir等对908名与涂阳肺结核患者接触过的儿童进行了为期3年的前瞻性研究，在381名T.SPOT.TB结果为阳性的接触者中，最终11名发展成为活动性结核，其发生风险是T．SPOT．TB阴性接触者的3．86倍(P=0．024)。 结核发病风险的预测 对于T.SPOT.TB阳性的人群，定期的复查监测斑点数。如果T.SPOT.TB的斑点数在短时间内显著增加，则强烈提示体内结核活动，此时给予预防性的治疗十分必要。 * 结核分枝杆 菌是胞内寄生菌，侵入机体后，首先引起固有免疫 反应，被巨噬细胞吞噬。在大多数感染者中，单纯 的固有免疫并不足以抑制结核分枝杆菌的生长增殖。 被感染的巨噬细胞凋亡后，释放出大量特异性抗原。 可被树突状细胞加工呈递给特异性的cD4、CD8和 ^y5 T细胞，以及CDI限制性T细胞，继而引发获得 性免疫¨j。CD4 T细胞在结核