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大规模动物细胞培养 与单克隆抗体的生产 细胞 动物细胞培养的发展简史 动物细胞培养的发展简史 动物细胞培养的应用 动物细胞培养的一般过程和技术 方瓶培养 滚瓶培养 生物反应器培养 哺乳动物细胞表达的产品 Thanks! * * 1885年, Roux，温生理盐水，在体外培养鸡胚组织； 1903年，Jolly，盖片悬滴法，培养蝾螈白细胞； 1906年，Beebe和Ewing，盖片悬滴法和血清，培养狗淋巴细胞，并观察到细胞的生长现象。 1907年，Harrison和Carrel，盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法，淋巴液培养蛙胚神经组织，并观察到神经细胞突起的生长过程。由此建立了体外培养组织和细胞的基本模式系统，标志着现代组织培养的建立。 1923年，Carrel设计了卡氏培养瓶，扩大了组织的生存空间。 1948年，Sanford，单细胞分离培养法，建立克隆细胞株?； 1957年，Dulbecco，单层（细胞）培养； 60年代，微载体培养技术，建立了大量的细胞系 70年代，基因工程技术、无血清培养基、杂交瘤技术 80年代，起动物细胞大量培养技术逐渐兴起 90年代，无血清培养技术 药物的临床前研究 人造器官 组织工程(人造皮肤、造血干细胞扩增和软骨组织修复等) 生产现代生物医药产品(疫苗、干扰素、重组蛋白、抗体、基因工程病毒) 二级种子 三级种子 n级种子 生产规模 …… 过程示意图 过程的描述 关键技术 高产克隆株筛选 . 氧供给和剪切损伤保护 . 种子反应器的设计与放大 . 细胞的代谢与控制 1. 反应器系统的开发 2. 细胞截留系统 3. 流加培养的过程控制 4. 蛋白的表达调控 5. 接毒工艺的优化 6. 无血清培养基的开发 7. 氧供给和损伤保护 . 灌注培养的过程控制 悬浮细胞 贴壁细胞 外源基因的扩增 1. 逐级扩大培养中的接种技术 2. 贴壁细胞培养的载体材料 3. 微载体的应用 4. 反应器中氧供给和损伤保护 5. 种子反应器的设计与放大 6. 细胞的代谢与控制 筛选高产株 至2004年2月美国FDA批准上市药物 急性心梗 2000.6 Genentech TNKase (CHO) Tenecteplase，t-PA突变体 囊性纤维化 1993.12 Genentech Pulmozyme (CHO) dornase alfa，DNA酶 Fabrys病 2003.4 Genzyme Fabrazyme (CHO) Algasidase beta，半乳糖苷酶-? Gauchers病 1994.5 Genzyme Cerezyme (CHO) Imiglucerase，葡糖脑苷脂酶 粘多糖贮积病 2003.4 Genzyme Aldurazyme (CHO) Laronidase， 粘多糖-?-L-艾杜糖醛酸水解酶 肺栓塞 2002.10 Abbott Abbokinase (胎肾细胞培养) urokinase，尿激酶 急性心梗；肺栓塞， 急性脑中风 1987.11 Genentech Activase (CHO) alteplase, tPA 酶（Enzymes）: 血清甲状腺球蛋白测试 1998.12 Genzyme Thyrogen (CHO) thyrotropin alfa，促甲状腺素 不孕症 2000.9 Serono S.A. Ovidrel human chorionic gonadotropin， 人绒膜促性腺激素 不孕症 1998.9 Serono S.A. Gonal-F（CHO） follitropin alfa，促滤泡素-? 不孕症 1997.9 Akzo Nobel Follistim (CHO) follitropin beta，促滤泡素-? 矮小症 1996.10 1996.8 Serono S.A. Serono S.A. Saizen (Mouse C127) Zorbtive(MouseC127) human somatropin，人生长激素 激素（Hormones）: 哺乳动物细胞表达的产品 脓毒症 2001.11 Eli Lilly Xigris (CHO) Drotrecogin alfa，活化蛋白C 中重度类风湿关节炎；银屑病 1998.11 Amgen/Wyeth ENBREL (CHO) Etanercept，TNFR-Fc融合蛋白 中重度银屑病 2003.1 Biogen/Idec Amevive (CHO) Alefacept，LFA3-Fc融合蛋白 Others: 胫骨骨折 2001.8 Stryker Osigraft(CHO) rh Osteogenic protein 1, BMP-7 脊骨退行性病变的脊骨融合 2002.7 Wyet