脂质和脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验221119.pptxVIP

血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定;血脂测定标准化：;受试者的准备;检测范围 血浆脂质测定（TC TG) 血浆脂蛋白测定(HDL-C LDL-C) 载脂蛋白测定(ApoA ApoB) 血浆脂代谢相关蛋白与酶的测定 脂质相关蛋白基因突变分析; 一、血浆脂质测定 （一）总胆固醇测定（化学抽提法、酶法） 1、化学法： 抽提→皂化→洋地黄皂苷沉淀纯化→显色比色 干扰因素多，准确测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程，因而操作较繁，不适于分析大批量标本，且不适于自动分析。; 2、酶法：胆固醇氧化酶- 过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法 (CHOD-PAP法） 第一反应：生成游离型胆固醇 胆固醇酯+H2O 胆固醇脂酶CHE 游离胆固醇＋游离脂肪酸 第二反应：用胆固醇氧化酶(CHOD)和过氧化物酶(POD)作用，诱导生成 醌色素，通过吸光度变化定量测定胆固醇。 游离胆固醇＋Ｏ2 CHOD △4－胆甾烯酮＋H2O2 2H2O2＋4－氨基安替比林＋酚 POD 醌亚胺 　 醌亚胺的最大吸收峰在500nm，吸光度与标本中的胆固醇含量成正比。 　　; 胆固醇酶测定法的试剂中，除了上述三种酶、酚和4-氨基安替比林外，还有维持pH恒定的缓冲液、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性，表面活性剂的作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来。 酶法是常规应用方法，快速准确，标本用量少，便于自动生化分析仪作批量测定。;评价：;【参考值】;影响TC水平的因素 ;　（二）甘油三酯（TG）测定 　　 物理法 　　化学法 　　酶法：常用，操作简便、快速准确 甘油激酶法（GK） 　　　　　甘油氧化酶法（GOD);甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法（GPO-PAP 法）; 方法学评价; 血清甘油三酯一般随年龄增加而升高，体重超过标准者往往偏高。 合适范围：≤1.70mmol/L(150mg/dl)， 升高：＞1.70mmol/L (150mg/dl)。;【临床意义】 ;磷脂测定： 利用磷脂酶（D）水解磷脂，测定产物，对其定量。 游离脂肪酸测定：油酸、棕榈酸、硬脂酸 非酶法测定：高效液相层析、比色、滴定、原子吸收 酶法测定：脂肪酶，测定产物乙酰CoA、AMP、 CoA， 进行定量。 ; 二、血浆脂蛋白测定 超速离心分离纯化法 电泳分离法 血浆静置实验 血浆脂蛋白胆固醇测定 HDL-C、LDL-C、Lp(a); 血浆脂蛋白胆固醇测定 　 脂蛋白既有蛋白质又有胆固醇及磷脂，但胆固醇含量较为稳定，因此目前以测定脂蛋白中的胆固醇总量的方法作为脂蛋白的定量依据。 HDL-C 　　LDL-C 　　Lp(a)-C;HDL-C测定 超速离心-化学沉淀法或酶法测定（参考方法） 　　以前临床上推荐用大分子多聚阴离子和两价阳离子沉淀血清中含ApoB（LDL和VLDL），然后用酶法测上清中的HDL-C。 　　磷钨酸－镁作沉淀剂是推荐常规方法。; 近年来，采用直接测定法（均相法），根据脂蛋白与表面活性剂亲合性差异测定，免去了标本预处理（沉淀）步骤，便于自动化，快速简便。; HDL-C 匀相测定法测定原理;HDL-C合适范围： ≥1.03mmol/L ,≤0.90mmol/L 。;ＬＤＬ－C　测定 LDL－Ｃ升高是ＡＳ发生发展的主要危险因素。; LDL-C 匀相测定法测定原理; LDL-C测定原理;本测定法在采用胆固醇酯酶及胆固醇过氧化物酶的胆固醇测定体系中，使用仅选择性使LDL溶解的界面活性剂，将LDL中含有的酯型胆固醇及游离型胆固醇诱导到胆固醇反应体系中，测定LDL-胆固醇。 除LDL之外的脂蛋白（HDL、VLDL\乳糜微粒）的酶反应受该界面活性剂及糖化合物的阻止，因此这些脂蛋白不会诱导到胆固醇反应体系中发生反应，而在反应液中以脂蛋白形式残存。根据这一原理可以仅仅直接测定血液中LD