药敏试验（扩散法）操作方法PPT.pptVIP

药敏试验（扩散法）操作方法 河南康星畜禽疫病诊断中心 马长宇内容: 一、药物敏感试验的目的与意义 二、常用的药敏测定方法 三、试验准备及用品 四、药敏试验操作步骤 五、结果观察 六、影响药敏结果的因素 一、概念 抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。 （1）MIC：体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度，临床医师可以根据MIC确定药物剂量。通常达到稳态的血药峰浓度（Css）max应为MIC的4-8倍，重症感染以大于8倍为妥。 （2）为方便临床给药，根据MIC提供一个定性的结果是必要的。临床医师根据敏感、中介、耐药的提示结合MIC可以方便地制定用药方案。 敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌 药物血液浓度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。 中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。 耐药（R）：表示该药物对细菌的MIC值等于或高于常规剂量下药物的血液浓度或组织浓度，细菌不能被该种药物抑制。 意义： 1、检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。避免盲目用药、滥用药、大剂量用药。 2、监测耐药性，分析耐药菌变迁，了解某一地区致病菌的耐药变迁、流行病学调查及监控，控制和预防耐药菌株的流行 3、为经验用药提供所选药物的参考依据，可预测抗菌治疗的效果。“敏感”治疗可能有效；“耐药” 肯定失败 4、新抗菌药的研究 以下情况不需进行药敏测定： 标本污染细菌，非致病菌引起 已知某些抗菌药对某菌有良好的抗菌作用且很少有耐药菌产生 已知细菌全部耐药的药物 对营养要求高而不易生长的细菌 二、常用的药敏测定方法 1、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等。 纸片法 手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上广泛使用此法。定性 2、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量） 通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏试验的方法。 定量 3、E测定法（E test）： 与扩散法相似，但药物包被于长塑料条上，能够精确测定MIC值。适于一些特殊病原菌的药敏测试，但价格较为昂贵。 4、全自动药敏仪法： 1、培养基 MH肉汤（MHB） Mueller-Hinton Broth 用途：用于抗生素敏感试验 配方：（g/L） 牛肉粉 2.0? 可溶性淀粉 1.5? 酸水解酪蛋白 17.5 pH值7.4?±?0.2??????? 25℃ 原理：牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、维生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒的代谢产物。 用法：称取本品21.0g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,备用。 MH琼脂（MHA） Mueller-Hinton Agar 用途：用于抗生素敏感试验 配方：（g/L） 牛肉粉 6.0? 可溶性淀粉 1.5? 酸水解酪蛋白 17.5? 琼脂 17 PH值7.3?±?0.1?????? 25℃ 原理：牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、维生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒的代谢产物；琼脂是培养基的凝固剂。 用法：称取本品?42.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,待冷至?50℃，倾入无菌平皿,备用。 1、是兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养基 2、如营养要求高可加0.5%羊血。 3、平板直径为9cm。 4、琼脂板厚度4mm。误差±1mm。 5、4℃保存7天。 营养肉汤（NB） Nutrient Broth 用途：一般细菌培养,转种,复壮,增菌等（GB标准） 配方：（g/L） 蛋白胨 10 牛肉粉 3 氯化钠 5 pH值7.2?±?0.2? 25℃ 原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠能维持均衡的渗透压。 用法：称取本品18.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶或管,?121℃高压灭菌15分钟备用。 营养琼脂（NA） Nutrient Agar 用途：一般细菌培养,转种,复壮,增菌等（GB标准） 配方：（g/L） 蛋白胨 10 肉浸粉 10 氯化钠 5 琼脂 20 pH值7.2?±?0.2? 25℃ 原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠能维持均衡的渗透压。 用法：称取本品18.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶或试管,121℃高压灭菌15分钟备用。 MH肉