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胎盘干细胞在组织工程中应用进展 　　[摘要]　作为一种新的种子细胞来源，本文论述了胎盘干细胞的临床必要性，分离方法及生物学特性，探讨了同种异体移植的免疫性及肿瘤原性，并总结了其在组织工程中的应用。 　　[关键词]　胎盘干细胞，组织工程 　　[中图分类号]　R71 [文献标识码]　A [文章编号]　1673-9701（2012）36-0009-03 　　自从美国科学家Langer　R[1]在1993年提出组织工程概念以来，再生医学的发展为临床诸多慢性及器官衰竭疾病的治愈带来了新的希望。研究者利用细胞移植替代病损组织，甚至整个器官。但是，为了获得按需使用的商品化组织工程产品，主要取决于如何获得维持构建器官所需的数目巨大的种子细胞。具有多向分化能力的干细胞在组织工程中得到了广泛应用[2]。适宜的种子细胞应该满足以下标准：细胞应该具有多向分化能力，简单易得；细胞活力好，能够大规模地获得；免疫耐受；无致瘤???，能在体外培养传较多代而不发生性状改变。最近，胎盘来源的干细胞引起了越来越多的关注。 　　1使用胎盘干细胞的临床必要性 　　与其他类型的细胞相比，干细胞具有独特的性状，它可向不同类型的成体细胞分化。按照来源的不同，干细胞可分为胚胎干细胞与成体干细胞。胚胎干细胞在合适的条件下可以向所有的成年组织分化，是拥有无限分化潜能的细胞。与其对应的是成体干细胞，一种广泛存在组织器官内的多能分化细胞，它们拥有有限的分化潜能，多数可分化为它们“驻留”处的组织。有趣的是，尽管不同的成体干细胞都有多向分化潜能，但鉴别主要是靠它的组织来源。人的胚胎干细胞目前还不能精确控制其向某一组织分化，且多用于克隆动物等研究[3]，而成体干细胞则有较少的伦理问题及较安全的分化潜能。骨髓间充质干细胞（bone　mesenchymal　stem　cells，BMSCs）是目前使用较广泛的成体干细胞，而且被认为是骨组织工程种子细胞的“金标准”[4]。但是，它在骨髓中的含量极少（约占有核细胞的1%），生长分化能力随年龄的增长而显著降低，因此需要寻找新的、标准的干细胞来源。不断有新来源的、能满足临床不同需要的成体干/祖细胞被分离报道，如脂肪源干/祖细胞、外周血源干/祖细胞等，而最近报道的胎盘源性干细胞（placenta-derived　mesenchymal　stem　cells，PMSCs）更是以其取材几乎不受限制、数量多、能预先培养储存等优势而成为研究的重点。 　　胎盘是母体与胎儿间物质交换的器官，由羊膜、叶状绒毛膜和底蜕膜构成。晚期囊胚着床后，滋养层细胞分裂增生，分为细胞滋养细胞与合体滋养细胞。胎盘由滋养细胞及间充质和血管共同组成，为免疫“豁免”组织，提示胎盘中可能存在干细胞成分[5]。目前的研究表明，PMSCs可从胎盘的实质组织中分离得到，并且PMSCs具有向其他组织细胞诱导分化的能力[6]。胎盘在孕妇分娩后即成为“医疗废物”，因而从中获取干细胞对受体无任何损伤，且胎盘来源广泛，便于取材，对供者无不利影响，因此，PMSCs有望成为BMSCs的理想替代来源。正确分离PMSCs、鉴定其表型和功能、研究在疾病治疗中的具体作用机制以及与其他免疫细胞之间的相互关系，对于深入认识PMSCs的特性、加速临床应用具有非常重要的意义。 　　2　胎盘干细胞的生物学特性及分离方法 　　根据国际细胞治疗学会的标准[7]，间充质干细胞至少要满足以下3个条件：能贴壁生长；表达CD105，　CD73和CD90等表面标志，不表达造血干细胞的表面标志；体外能向骨、软骨、脂肪细胞分化。根据胎盘源性干细胞研讨会达成的共识以及国际细胞治疗协会关于多能间充质细胞的最低标准，明确了这些干/祖细胞的分离方法以及应满足的条件[8]：①可黏附于塑料瓶壁。②形成纤维母细胞克隆。③表达特征性表面抗原，CD73、CD90、CD105表达率应95%，而造血干细胞标志应阴性或表达率≤2%。④多向分化潜能，包括向骨、脂肪、软骨、血管/内皮分化。⑤胎儿来源。Jaroscak等[9]首先报道了关于胎盘来源的干细胞，发现胎盘贴壁细胞与BMSCs表达基本相似的细胞表面标志，都具有多向分化潜能，但胎盘贴壁细胞的同质性不如BMSC。 　　PMSCs的提取多采用机械分离加酶消化法。BL　Yen等[10]取足月产妇的胎盘组织，剪去底蜕膜、羊膜及脐带，剪碎，在含有胶原酶的消化液中消化，收集离心的细胞，以完全培养基重悬后以1∶2的比例加到淋巴细胞分离液上离心后收集中间层细胞接种培养，通过换液去除不贴壁的细胞，通过挑取单细胞克隆培养进行纯化。Fukuchi等[11]从（１１．４±２．１）　g胎盘组织中能获得平均（１０８±７８）×106个单个核细胞，当平均一个胎盘为（７２８±１４１）　ｇ时，则平均一个胎盘可提供6.8×109个单个核