第十五章基因重组与基因工程PPT.ppt

　 　 保守性复制 　 　 插入序列 + 反向重复序列 + 靶位点 内切酶裂解 (转座酶) 切端形成新的磷酸 二酯键 (转座酶) 新 DNA (poly I) 合成 与连接 (转座酶) 位点特异的 重组 (转座酶) 老定位 新定位 图 15-4 插入序列的复制性转座 3 3 5 5 3 5 3 5 　 　 转座子转座 　　转座子（transposons）：可从一个染色体 位点转移到另一位点的分散重复序列。 　反向重复序列 组成 转座酶基因 　特殊基因：如抗生素抗性基因等 3’ 5’ 3’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 内切酶 recBCD DNA侵扰 recA 分支迁移 recA 内切酶 recBCD DNA 连接酶 Holliday中间体 机制 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ Holliday中间体 内切酶 ruvC 内切酶 ruvC DNA 连接酶 DNA 连接酶 图15-6 同源重组机制 Holliday中间体 工具酶的定义 工具酶：指能用于DNA和RNA分子的切割，连接，聚合，反转录等有关的各种酶系统。 常 用 的 工 具 酶 工 具 酶 名 称 主 要 功 能 限制性内切核酸酶 在DNA分子内部的特异性的 restriction endonucleases 碱基序列内部进行切割 DNA连接酶 将两条以上的线性DNA分子或片段 DNA ligase 催化形成磷酸二酯键连接成一个整体 DNA聚合酶I 通过向3’端逐一增加核苷酸以填补双链DNA分子上的单链 DNA polymerase I 裂口，即5’→3’DNA聚合酶活性与3’→5’及5’→3’外切酶活性 多核苷酸激酶 催化将把一个磷酸分子加到多核苷酸链的 DNA polymerase kinease 5’－OH末端上 反转录酶 以RNA或DNA链为模板合成互补的cDNA链 reverse transcriptase DNA末端转移酶 将多聚物尾巴加到了线性双链 DNA terminal Deoxynuc 或单链DNA分子的3’－OH末端或DNA的3’－末端标dNTP leatidy transferase (接下表格) 常 用 的 工 具 酶 (续上表格) 工 具 酶 名 称 主 要 功 能 碱性磷酸酶 去除DNA,RNA,dNTP的5’磷酸基团 BAP orCIP 核酸外切酶III 降解DNA3’－OH末端的核苷酸残基 exonuclease III 降解酶S1 降解单链DNA或RNA,产生带5’磷酸的单核苷酸或 nuclease S1 寡聚核苷酸，同时也可切割双链核酸分子的单链区核酸酶Bal 31 降解双链DNA,RNA的5’及3’末端， nuclease Bal31 高专一性单链核苷酸 Taq DNA 聚合酶 能在高温（72℃）下的单链DNA为模板，