第二章 基因工程基本技术原理-DNA序列分析PPT.ppt

;目的与要求;2.5.1 Sanger双脱氧链终止法 ■ 2.5.2 Maxam－Gilbert化学修饰法■ 2.5.3 序列分析自动化■ 2.5.4 杂交测序■ 2.5.5 DNA策序的商业运作及存在问题■ 2.5.6 思考问题■;2.5.1 Sanger双脱氧链终止法;引物—延伸测序策略;反应：同时加入引物和模板、DNA聚合酶1、一种ddNTP、以及 四种dNTP（有一种带放射性标记）。 变性胶电泳分离反应混合物。 放射自显影术，检测单链DNA片段的放射性带。 结果判读，从放射性X光底片上，直接读出DNA的核酸顺序。;GTACGTTGACGCC;酶、原料比例;2.5.1.2 Sanger双脱氧-M13体系 DNA序列分析法;克服缺点的一种途径—DNA分子克隆;M13载体克隆DNA片段;这种随机的方法，也需要通过顺序的测定将派生的序列拼连起来，恢复成原来结构形式的总DNA序列。;使用M13载体系列的优点;2.5.1.3 Sanger 双脱氧—pUC体系 DNA序列分析法;Sanger 双脱氧—pUC体系 DNA序列分析法基本步骤;2.5.2 Maxam－Gilbert化学修饰法;2.5.2.1 Maxam－ Gilbert化学修饰法的原理;出发材料：局部消化的DNA分子群体中纯化出特定的末端带有放射性标记的DNA片段 (双链或单链） 关键：4种核苷酸碱基中，有1～2种发生特异性的化学切割仅应，包括碱基的修饰、修饰的碱基从其糖环上转移出去以及在失去碱基的部位发生DNA链的断裂三个主要内容。;碱基特异的化学切割反应——肼（NH2·NH2）;碱基特异的化学切割反应——硫酸二甲酯［（CH3O）2SO2］;2.5.2.2 化学修饰法测序图解;C T+C G+A A;2.5.2.3 Maxam－Gilbert化学修饰法优点;2.5.3 序列分析的自动化;2.5.4 DNA杂交测序;杂交的检测;杂交测序的应用;2.5.5 DNA策序的商业运作及存在问题;S;“测序”思考回答问题