宫颈鳞癌及上皮内瘤变与p16ink4a蛋白表达及hpv感染的关系及临床意义-relationship between squamous cell carcinoma of cervix and intraepithelial neoplasia, expression of p 16 ink 4a protein and hpv infection and its clinical significance.docxVIP
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宫颈鳞癌及上皮内瘤变与p16ink4a蛋白表达及hpv感染的关系及临床意义-relationship between squamous cell carcinoma of cervix and intraepithelial neoplasia, expression of p 16 ink 4a protein and hpv infection and its clinical significance
学位论文独创性说明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名:时间:年月日学位论文版权授权书本人完全了解新疆医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查询。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索,有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。必威体育官网网址的学位论文在解密后使用本规定。研究生签名:时间:年月日导师签名:时间:年月日前言宫颈癌(cervicalcancer,CC)是发生在全球妇女中第二大常见的恶性肿瘤[1],其患病率已跃居各类妇科恶性肿瘤之首[2,3],因此,对CC防治的研究必须高度重视。CC细胞一个重要的生物学特性是细胞周期调控的失衡[3]。在正常宫颈上皮→宫颈上皮内瘤变→宫颈癌这一进展过程中,某些基因结构、功能等都会发生变化,这些基因可以作为这一进展中的分子标志,以便早期发现、诊断CIN和宫颈癌。P16INK4A基因作为一种新型的抑癌基因直接作用于细胞周期,通过cyclinD-CDK4-pRb-E2F通路履行调控细胞周期的职责[4]。控制细胞的生长与分化,参与肿瘤的形成与发展。近年来研究显示,抑癌基因P16INK4A几乎在100%的CC和CINⅢ中表达,认为可将P16INK4A蛋白作为一种生物学标志物进行宫颈癌的早期筛查[5,6]。P16INK4A基因及产物在大多数人类原发性肿瘤细胞中均缺失,而它却在CIN和CC中表达,它参与HPV感染引起的宫颈病变发展,P16INK4A可通过负反馈调节机制表达上调。在CC及其癌前病变中,pRb可被HPVE7蛋白灭活,因此导致P16INK4A的表达,Wang等[7]研究发现,在CIN和SCC中P16INK4A阳性表达率为75%,而在正常宫颈上皮P16阳性表达率只有12.5%。这说明P16INK4A在宫颈病变进展过程中是一个较有价值的标志物。P16INK4A的失活似乎涉及与HPV相关的致癌作用,因为E6和E7癌蛋白可能会损伤P16INK4A。Marcia等[8]发现P16INK4A的表达可能与HPV16/18相关。这说明P16INK4A的表达与HPV引起的宫颈癌的发生发展有关。1974年,ZurHausen等[9]提出,HPV与宫颈癌发病相关的假设。此后,对HPV感染与宫颈癌的相关性进行大样本统计后指出,93%以上的宫颈癌组织中可检出HPV-DNA。大量临床资料表明,HPV感染是宫颈癌的根本致病因素[10],而且HPV持续感染使宫颈癌的发生风险提高250倍[11]。迄今已发现120多种HPV亚型,其中40余种与女性生殖道病变有关,20余种与肿瘤有关。依致病力大小,将HPV亚型分为高危型和低危型两类[12]。高危型主要有16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82等15种亚型[13,14],低危型主要有HPV6、11、40、42、43、44、54、61、70、72、81和CP6lOS等12种亚型[15]。Bulk等[16]报道95%以上的宫颈癌是由HR-HPV引起,其中HPV16与宫颈鳞癌的发生密切相关,而HPV18则与腺癌的发生密切相关,HPV-DNA阳性者,其预后相对较差。由此可见,HPV亚型不同,其致癌力不同,宫颈癌的预后也不同。因此,临床上确定患者的HPV亚型具有重大意义。本研究采用基因芯片技术对HPV感染进行分型检测,并通过免疫组织化学法对P16INK4A蛋白的表达进行检测,研究P16INK4A蛋白以及HPV感染在慢性宫颈炎、CIN及SCC中的表达及特点,探讨它们在宫颈癌发生发展过程中的关系,寻找能够作为宫颈癌早期预警的生物学标记物。资料与方法1.一般资料组织标本:取自08年1月至08年12月新疆医科大学附属肿瘤医院妇科门诊宫颈活检和住院行锥切或手术切除的宫颈组织共114例,其中慢性宫颈炎20例、CINⅠ24例、CINⅡ22例、CINⅢ25例和宫颈鳞癌23例。所有病例术前均未接受过任何治疗,所有病例均经病理学检查证实,选取标本均经10%中性甲醛固定,石蜡包埋。HPV-DNA检测标本:本研究中的114位患者在取组织标本前,在宫颈外口和颈管内用取样刷采取脱落细胞和分泌物,放入标本保存液中,4℃保存,接受HybriMax在HPV感染的分型检测。本实验中的所有患者在取标本前均未接受过任何治疗。2.样本含量估计采用多个样本率比较的方法[17]计算公式得出样本含量为:183.质量控制3.1临床质量控制:所选取的宫颈组织病理学诊断标准参照“
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