gata3基因多态性与laptm5基因功能在儿童白血病中的研究-study on gata 3 gene polymorphism and la ptm 5 gene function in childhood leukemia.docxVIP

GATA-3基因多态性与LAPTM5基因功能在儿童白血病中的研究中文摘要第一部分GATA-3 SNPrs3824662与中国儿童急性淋巴细胞白血病的相关性目的：研究GATA结合蛋白3（GATA-bindingprotein-3, GATA-3）SNPrs3824662 在中国儿童急性淋巴细胞白血病（Acutelymphoblasticleukemia,ALL）中的分布，分析其与中国儿童急性淋巴细胞白血病的相关性。方法：收集137 例中国儿童ALL患者及389 例非血液系统恶性疾病人员EDTA 抗凝静脉血，提取DNA，采用巢式PCR 扩增包含GATA-3SNPrs3824662 位点的特异性条带后送公司测序，对其进行单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphisms,SNPs）分析。SPSS 18.0 分析软件对数据进行分析。结果：基因型C-C、C-A和A-A及等位基因C、A在对照和中国儿童ALL中比例没有差异，且与ALL的临床指标没有相关性。结论：GATA-3SNPrs3824662位点的多态性改变与中国儿童ALL的发病没有相关性，提示该位点与中国儿童ALL发病机制无关。关键词：中国儿童ALL；GATA-3；rs3824662位点；SNP第二部分儿童急性淋巴细胞白血病患者LAPTM5基因的表达及临床意义目的：溶酶体相关的五次跨膜蛋白(lysosomal-associated protein transmembrane5, LAPTM5)功能尚不十分明了，本研究通过定量PCR 检测儿童急性淋巴细胞白血病（Acutelymphoblasticleukemia,ALL）患者骨髓标本中LAPTM5mRNA的相对表达量，回顾性的分析其表达水平与儿童ALL临床特征的相关性。I中文摘要GATA-3基因多态性与LAPTM5基因功能在儿童白血病中的研究方法：病例来源于2012-2013 年期间在苏州大学附属儿童医院诊断和治疗的ALL患者144 例（初诊82 例、完全缓解54 例、复发8 例）；40 例对照为同期的特发性血小板减少性紫癜（IdiopathicThrombocytopenicPurpura,ITP）或细胞株。应用定量RT-PCR 方法检测LAPTM5 基因的mRNA表达水平，利用SPSS18.0 统计学软件，分析LAPTM5 在儿童ALL中的意义。结果：初诊患儿LAPTM5mRNA的相对表达水平高于对照组，且差异有统计学意义（P0.001）；在ALL患者中，初诊组和复发组LAPTM5 mRNA的表达水平均明显高于缓解组（P0.001，P=0.006），复发组与初诊组间没有差异（P=0.171），复发组高于对照组，差异有统计学意义（P=0.033），缓解组与对照组之间无差异（P=0.985）。初诊B-ALL中LAPTM5的表达明显高于儿童初诊T-ALL患者。LAPTM5的表达与骨髓原始细胞比例呈正相关(P=0.034, r=0.303)；与年龄、性别、初诊白细胞计数（WBC）、血红蛋白（HB）、血小板(PLT)、C反应蛋白（CRP）、乳酸脱氢酶（LDH）、外周血幼稚细胞比例没有相关性，与儿童ALL的早期治疗反应及危险度分级也没有相关性；与诱导缓解治疗33 天时MRD的表达水平无相关性（P=0.695，r=-0.055）。结论：儿童初诊ALL高表达LAPTM5基因，在B-ALL中的表达高于T-ALL，与骨髓中白血病细胞数具有正相关性，但与疾病的预后指标没有相关性。关键词：儿童；急性淋巴细胞白血病；LAPTM5 基因；定量RT-PCR第三部分溶酶体五次跨膜蛋白基因的慢病毒载体的构建及在K562细胞中的表达目的：构建溶酶体相关五次跨膜蛋白(lysosomal-associated protein transmembrane 5,LAPTM5)基因的慢病毒表达载体，为研究该基因在白血病细胞中的功能奠定基础。方法：以NB4细胞的cDNA为克隆模板，通过PrimerPremier 5软件设计含有EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的基因克隆引物，将LAPTM5CDS区域克隆入pLVX-IRES-Puro慢病毒表达载体。利用pLVX、pLP-VSVG、pLP1、pLP2慢病毒质粒包装系统，在293T细胞中采用磷酸钙沉淀法包装LAPTM5过表达慢病毒后侵染K562细胞，并对LAPTM5 过表达慢病毒进行一系列验证。结果：经过PCR 方法，有效扩增了LAPTM5基因编码区,构建了pLVX/LAPTM5慢病毒表达载体，测序分析表明所克隆的LAPTM5 基因编码区序列无误。DNA水平鉴定表明LAPTM5基因已成功插入到K562细胞基因组中，且在mRNA和蛋白水平较亲本株和转空载体细胞高表达。结论：成功地构建了人LAPTM5的慢病毒表达载体