医疗器械检化员微生物ppt课件.ppt

物体表面细菌总数 将每个采样管震打80次，混匀，10倍递减稀释，每个稀释度（取3个稀释度）分别取1ml放于灭菌培养皿（每个稀释度倾注2块平板），用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养24h,观察结果，取菌落数为30～300的培养皿计算，求出平均菌落数。 菌数（cfu）/cm2= 平均菌数×稀释倍数/采样面积（cm2） 生产人员手细菌总数 生产人员手细菌总数 方法：被检人五指并拢，将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在右手指曲面，从指尖、甲沟至指根处往返涂抹10次后，将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的试管中。 生产人员手细菌总数 将每个采样管震打80次，混匀，10倍递减稀释，每个稀释度（取3个稀释度）分别取1ml放于灭菌培养皿（每个稀释度倾注2块平板），用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养24h,观察结果，取菌落数为30～300的培养皿计算，求出平均菌落数。 菌落数（cfu）/每只手=平均菌数×稀释倍数 平皿计数法计数原则 1.先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。 2.首先选择平均菌落数在30~300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为细菌总数(见例1)。 3.若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数；若大于2，则取其中较小的菌落总数(见例2及例3)。 平皿计数法计数原则 4.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数(见表1，例4)。5.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数(见表1，例5)。6.若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数(见表1，例6)。 7.若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告(见表1，例7)。 例次 不同稀释度的 平均菌落数 两个稀释度 菌落数之比 菌落总数 报告方式 10-1 10-2 10-3 1 1365 164 20 － 16400 16000或1.6×104 2 2760 295 46 1.6 37750 38000或3.8×104 3 2890 271 60 2.2 27100 27000或2.7×104 4 无法计数 4650 513 － 513000 51000或5.1×105 5 27 11 5 － 270 270或2.7×102 6 无法计数 305 12 － 30500 31000或3.1×104 7 0 0 0 － 1×10 10 稀释度选择及菌落总数报告方式 无菌实验相关标准 GBT19973.2-2005-医用器材的灭菌 微生物学方法 第二部分：确认灭菌过程的无菌试验 ISO 11737-2 2009-医用器材的灭菌 微生物学方法 第二部分：确认灭菌过程的无菌试验 无菌实验：培养条件 不论哪种无菌试验方法：FTM32.5±2.5℃，不少于14天；SCDB22.5±2.5℃，不少于14天； 改良马丁23-28℃，不少于14天。 如果14以内观察到阳性结果，不必继续培养。 无菌实验阳性对照 应根据供试品特性选择阳性对照菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品．以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗霉菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。加菌量小于l00cfu，供试品用量同供试品无菌实验时每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养48～72小时应生长良好． 阴性对照 阴性对照：阴性对照供试品无菌实验时，应取相应溶剂和稀释同法操作作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。 无菌实验：结果判断 肉汤培养基有菌生长的常见三种形式： 混浊生长：液体变混浊。 菌膜：液体澄清，表面有一薄层菌膜。 沉淀生长：液体澄清，管底有沉淀物 混浊生长：液体变混浊 肉汤培养基有菌生长的常见形式 无菌实验：结果判断 1.阳性对照管应生长良好，阴性对照管应无菌生长 2.培养期间逐日观察并记录是否有菌生长，如培养14天后，培养基出现浑浊，但不能确定是否有微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基或划线接种于斜面培养基上，细菌培养两天，霉菌培养三天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊或斜面是否有菌生长；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。 释出物检查 无菌实验验证：释出物检查 目的：对未知或可疑的供试品