叶黄素基于nrf-2are信号途径对人结肠癌ht29细胞增殖抑制作用的研究-study on the inhibitory effect of lutein on proliferation of human colon cancer ht29 cells based on nrf - 2 are signaling pathway.docxVIP
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叶黄素基于nrf-2are信号途径对人结肠癌ht29细胞增殖抑制作用的研究-study on the inhibitory effect of lutein on proliferation of human colon cancer ht29 cells based on nrf - 2 are signaling pathway
原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者:日期:年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者:日期:年月日摘要目的:结肠癌是常见的一种威胁人类健康和生命的消化系统恶性肿瘤,具有比较高的发病率和死亡率。目前全世界新增的结肠癌患者超过百万人,其死亡率在各种恶性肿瘤中排名第三位。结肠癌的发病是多种因素共同作用的结果,并且发病速度快、隐匿性高,患者的生存周期非常短。结肠癌已经成为严重威胁病人生命的一种恶性肿瘤。目前关于结肠癌的治疗手段十分单一,主要是切除、化疗和放疗,且效果十分不理想,病人的复发率高。化学疗法常常使用5FU、丝裂霉素和甲环亚硝脲,但是临床效果尚不十分理想。故进一步地寻求有效的能够干预阻断人结肠癌发生和发展的天然植物药物具有重要的理论及实用意义。叶黄素(Lutein)是一类广泛存在于各种瓜果蔬菜中的含氧类胡萝卜素,是一种天然的抗氧化的植物化学物。叶黄素具有防治视网膜病变、色素变性、保护视力、延缓动脉硬化以及抗肿瘤等许多的生理功能。本实验室早期的实验研究已经证明了达到一定的浓度之后的叶黄素可明显抑制肝癌细胞、胃癌细胞、乳腺癌细胞以及食管癌细胞的增殖。本实验宗旨在于研究探索叶黄素对人结肠癌HT29细胞增殖的抑制作用以及探索其可能存在的分子作用机制。方法:本次实验采用CCK8方法检测绘制人结肠癌HT29细胞连续8d的生长曲线;在培养HT29细胞的96孔培养板中加入不同浓度的叶黄素,然后分别培养24h,48h,72h后,采用CCK8法检测不同浓度的叶黄素对人结肠癌HT29细胞的抑制增殖作用的影响;倒置显微镜下观察并拍照记录叶黄素对人结肠癌HT29细胞在形态学上的影响;应用流式细胞仪检测叶黄素对人结肠癌HT29细胞周期分布的影响;用不同浓度的叶黄素作用于人结肠癌HT29细胞48h后,采用RT-PCR技术检测人结肠癌HT29细胞中Nrf-2和HO-1的mRNA的表达水平的变化情况;采用Westernblot技术检测人结肠癌HT29细胞内Nrf-2和HO-1的蛋白的表达水平的变化情况。结果:CCK8法检测的最终结果显示,叶黄素能够显著地抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,并且存在着时间依赖性和剂量依赖性(P0.01)。80mg·L-1的叶黄素作用人结肠癌HT29细胞24、48、72h后,抑制率分别为24.92%、45.11%、53.68%。当用160mg·L-1的叶黄素作用人结肠癌HT29细胞24、48、72h后,抑制率分别为30.91%、58.51%、78.09%。利用流式细胞仪检测人结肠癌HT29细胞周期I的结果表明:不同浓度的叶黄素处理人结肠癌HT29细胞48h后,人结肠癌HT29细胞的细胞周期发生明显阻滞,G0/G1期的细胞数量显著增加,这说明叶黄素可以阻滞人结肠癌HT29细胞生长在G0/G1期。采用RT-PCR技术检测后的结果显示,人结肠癌HT29细胞经过不同浓度的叶黄素处理后,细胞中的Nrf-2和HO-1的mRNA的表达水平随着叶黄素的浓度的增加明显上调,且具有剂量依赖性(P0.01),说明叶黄素可以诱导Nrf-2和HO-1基因的mRNA的转录表达。采用Westernblot技术检测的结果显示,不同浓度的叶黄素作用于人结肠癌HT29细胞48h后,细胞中的Nrf-2和HO-1的蛋白的表达水平与未经叶黄素处理的对照组相比明显上调,且具有剂量依赖性(P0.01)。结论:叶黄素能够有效的显著的抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,其可能存在的分子作用机制与阻滞细胞周期,上调Nrf-2/ARE信号途径中Nrf-2和HO-1的mRNA的表达水平,上调Nrf-2和HO-1的蛋白表达水平有关。关键词:叶黄素;结肠癌;细胞增殖;Nrf-2;HO-1IIAbstractBackgroundandpurpose:Coloncancerisacommondigestivesystemmalignanttumorthatisathreattohumanhealthandlife,withhi
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