免疫应答和免疫调节 王忠.pptVIP

2）益生素：粘膜结构、IgA+细胞、细胞因子、IgA 3） 微量元素：锌、硒，粘膜结构、粘膜免疫相关细胞、粘蛋白 4）短链脂肪酸(SCFAs)：乙酸、丁酸，进小肠黏膜细胞增生,维护肠黏膜形态。尤其是乙酸盐可扩张肠道血管,增加肠道血流, 5）核苷酸：肠细胞的分化、生长与修复 6）左旋肉碱 ：提高肠黏膜细胞分解氧自由基的能力,降低氧自由基在组织中的浓度,减少细胞膜的脂质过氧化反应 7）发酵纤维素和功能型寡糖：激黏膜生长,加强消化和黏膜免疫。 第四节、免疫学研究常用研究手段 免疫器官指数 （胸腺、法氏囊、脾脏等）的重量以及相对于体重比值 吞噬功能：吞噬细胞活性、移动能力、呼吸爆发（细胞GSH酶、H2O2、超氧阴离子、NO等）、杀菌、分泌信号分子（细胞表面相关受体表达、细胞因子分泌）等能力评价吞噬细胞的吞噬能力 巨噬细胞吞噬：(白色葡萄球菌、大肠杆菌、异种动物红细胞） 中性粒细胞：（异嗜白细胞）吞噬(白色葡萄球菌、大肠杆菌、异种动物红细胞）和呼吸爆发 单核细胞吞噬：（中性红染料、细菌） 细胞免疫功能检测方法 检测免疫细胞数量 玫瑰花环试验：E玫瑰(T细胞），EA和EAC玫瑰花环试验（B细胞） 淋巴细胞酸性a-醋酸萘酯酶阳性率：检测成熟T细胞（ANAE+%)； 流式细胞仪：利用细胞表面标志如CD标志，检测和分离各种免疫细胞 免疫细胞功能检测方法 淋巴细胞转化试验：检测细胞（外周血、脾脏、淋巴结）免疫功能。 3H-TdR掺入法、 MTT法（有丝分裂原刺激法非特异性刺激源如ConA、PHA、PMM、凝集素; LPS；特异性刺激因子（抗原）如：结核菌纯化蛋白PPD、细菌类毒素LPS、LTA，组织抗原、抗血清、疫苗等) 白细胞移动抑制试验：检测机体对某种抗原的细胞免疫反应性状态。 细胞毒性T细胞（CD8+T，CTL）试验：检测外周血致敏的淋巴细胞（CD8+T细胞）对特异性靶细胞（病毒或肿瘤细胞系）的特异性抗杀伤作用。有51Cr释放法和形态学方法。 NK细胞杀伤试验： 3H-TdR掺入法、 51Cr释放法和乳酸脱氢酶试验。靶细胞为YAC-1细胞株和K562。 流式细胞仪：分离和检测各种免疫细胞功能 皮肤迟发型过敏反应DTH：对PHA等皮肤迟发型过敏反应（皮肤厚度） 抗体生成细胞测定： ELISA-spot试验 细胞因子及其受体测定 免疫学方法：检测蛋白水平，ELISA（定量双抗体夹心ELISA商品化试剂盒，可检测血清、血浆、细胞培养上清和组织中的IL（ng-mg/mL)。RIA法（竞争法，检测pg,ng/mL,样本只需50微升) 分子生物学方法：检测mRNA , RT-PCR\ 32P标记核苷酸+放射自显影、分子杂交检测细胞因子PCR扩增产物 生物活性测定：利用某一细胞因子能特异性地抑制或刺激某些指示细胞增值的特性，通过3H-TdR掺入法或MTT法显色，反映细胞因子的活性水平。 干扰素活性测定：抗病毒实验、用小鼠IFN-r处理RAW264.7细胞检测细胞培养上清中NO2-浓度，判断细胞释放NO，进而计算出其活性。 基因组学或蛋白质组学检测：提取组织总RNA和蛋白质，分别进行基因芯片检测，分析上调和下调基因数量；蛋白质2D-电泳，然后进行抗体杂交。 抗体或蛋白质检测方法 免疫球蛋白水平：主要检测各类Ig水平。血清电泳(巨球蛋白）、免疫电泳、Igs免疫比浊法、琼脂扩散（IgG）、Igs ELISA 等 抗体水平测定：HI、AHI、AGP、VN、免疫荧光抗体技术、ELISA（大批）、RIA。如（以绵羊红细胞（SRBC）、OVA、BSA、大肠杆菌、鸡新城疫病毒、禽流感疫苗等为抗原的机体产生抗体的能力） 补体测定：补体结合试验（测定C3\C4\MBL, 溶血素等） 蛋白质检测：SDS法+免疫转印Western bloting 第五节、营养免疫学常用的研究模型 一、免疫应激模型: 腹腔、静脉或肌肉连续注射细菌如大肠杆菌、沙门氏菌的脂多糖（liposaccharide, LPS) 是营养免疫学中常用免疫应激模型。 糖皮质激素Glucocoticoid口服处理 二、免疫抑制模型 T 细胞免疫抑制模型：连续口服或注射 环孢霉素cyclosporine, CsA， B细胞免疫抑制模型：连续口服或注射 环磷酰胺cyclophosphamide or cytoxan 三、病原微生物感染模型：细菌、病毒、或寄生虫感染 1.家禽肠道病原细菌：常选择如下三个病原菌,一般在10^7-10^10 CFU/ML 致病性大肠杆菌 (pathogenic Escherichia coil, O1,O2, O35, O78)：选择3周龄以内雏鸡，采用连续7天口服大剂量；或者不