动物病毒学课件第四篇 章：病毒的复制.pptVIP

4.1 用于病毒复制研究的实验系统 4.2 病毒的复制周期 4.3 病毒的异常复制和缺损病毒; 病毒的生命存在形式:;4.1 用于病毒复制研究的实验系统;胞膜：吸附、侵入、囊膜的获得、释放 胞浆：生物合成、装配、包涵体形成 胞核：生物合成、装配、囊膜的获得、包涵体形成;原代细胞 继代细胞 传代细胞;优点：;常用传代细胞系的种类;二、细胞培养的基本方法;静置培养法 将拟培养对象直接接种在培养瓶内或细胞板中，再放入培养箱进行培养的方法。;旋转培养法 将所培养的组织细胞接种在一管状培养器皿内，再将旋转管固定在一可旋转的装置上，边旋转边培养的一种培养方法。 与非旋转培养相比，细胞周围的物质环境更均匀。 ;悬浮培养和微载体培养 ;细胞培养物的常温短期保存 细胞培养物的长期保存 ;实验室中细胞的短期保存;1.将刚长满单层的细胞，按细胞传代方法消化吹散后，装入离心管中。 2.2000-3000r/min离心5-10min。 3.用适量的含有20%犊牛血清、10%二甲亚砜（DMSO）的DMEM悬浮，分装于细胞冻存管中。 4.置4℃ 2h，-20℃ 2h，-70℃过夜，然后置于液氮中长期保存。 ——或在液氮气相中过夜，然后置于液氮中长期保存。 ——或置于液氮气相中，按5min 1cm的速度逐渐往下降，直至液氮中长期保存。 ——将冻存管放入装有异丙醇的程序降温盒中，再置-80℃过夜晚，后放入液氮;1、将冻存于液氮中的细胞取出。 2、迅速置于42℃-50℃水浴中，并不停地摇动，使其快速解冻。 3、2000-3000r/min 2-5min离心去掉冻存液，用生长液悬浮，再置于细胞培养瓶中进行培养。 或者不离心直接转移到细胞培养瓶中，等其贴壁几小时后，再换入新的生长液继续培养。;4.2 病毒的复制周期;吸附(Adsorption/Attachment) 侵入(Penetration) 脱壳(Uncoating) 病毒成分的合成(Synthesis of viral neucleic acid and protein) 装配与释放(Assembly and Release);病毒与细胞表面特异性受体发生碰撞，病毒附着于细胞受体而引起的病毒感染的第一阶段。;特点： 非特异性、不稳定性、可逆性 吸附速度与细胞和病毒的浓度成正比 与溶液中的Ca2+、Mg2+和Na+等离子有关 解吸的病毒具备感染性 ;不可逆吸附：病毒蛋白（吸附蛋白，VAP）与细胞膜???面特定受体（细胞受体）的特异性结合。;吸附蛋白（virus attachment protein, VAP)：;病毒受体（viral receptor) ：;HIV - Life History;ADSORPTION;In general：几分钟—几十分钟 病毒感染细胞时的吸附处理时间：30-60min;二、侵入(Penetration);细胞内吞(endocytosis) 有囊膜或无囊膜的动物病毒;有囊膜病毒;;H+;H+;膜融合（membrane fusion) 病毒囊膜与细胞膜的融合过程，在除去囊膜的同时，将核衣壳导入到细胞内。有囊膜病毒的主要侵入方式，由病毒的具有细胞融合活性的囊膜糖蛋白介导。;PENETRATION;直接侵入(direct penetration)（移位） 许多无囊膜病毒侵入细胞的方式，机理尚不清楚 病毒吸附蛋白与细胞受体结合后，细胞膜的流动性引起病毒衣壳蛋白的重排和构型变化，加之细胞膜上可能存在的水解酶的作用，从而导致病毒核酸进入细胞质中，侵入与脱壳同时完成。 病毒衣壳直接进入细胞内。;PENETRATIONNON-ENVELOPED VIRUSES ;PENETRATIONNON-ENVELOPED VIRUSES ;植物病毒的侵入方式：;无囊膜噬菌体—注射式侵入 有尾噬菌体：利用尾部的溶菌酶部分破坏细菌细胞壁，尾管刺入细胞，将病毒核酸注入细胞，衣壳留在细胞外。e.g. T偶数噬菌体：T2、T4;三、脱壳(Uncoating);动物病毒由于不同的结构类型和不同的侵入方式，脱壳过程较为复杂：;动物病毒由于不同的结构类型和不同的侵入方式，脱壳过程较为复杂：;1)呼肠孤病毒，无囊膜病毒，但有两层二十面体对称壳体，并不发生完全的脱壳;2)有些在细胞核内增殖的DNA病毒，如乳多空病毒、腺病毒和疱疹病毒，其核衣壳在未被完全脱壳的情况下就进入细胞核，在核内完成脱壳。;4）痘病毒;四、病毒成分的合成（病毒核酸和蛋白质的合成）;1. 病毒核酸的复制和蛋白质的合成分成5个连续的阶段：;酶：在病毒的核酸复制、晚期转录和晚期翻译中发挥作用 其它蛋白质（功能蛋白质）：参与改变或抑制宿主细胞大分子合成（影响细胞正常生物合成）