一株抗真菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件的初步研究_权春善.docVIP

————————————————————————————————————————————————————— 一株抗真菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件的初步研究_权春善 46卷　1期 2006年2月4日 微生物学报ActaMicrobiologicaSinica46(1):7～124February2006 一株抗真菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件的初步研究 权春善,王军华,徐洪涛,范圣第 1 2 2 1 1(大连民族学院生命科学学院生物工程研究中心　大连　116600)2(大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系　大连　116024) 摘　要:从堆肥中分离到一株对植物病原菌尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)具有强烈抗菌活性并具有较广抗菌谱的细菌Q-12菌株。通过形态观察、生理生化实验、16SrDNA同源性序列分析以及部分特异性基因序列分析,鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌。该菌的最适培养基组成为:葡萄糖5g L,NH4Cl1g L,牛肉膏0.8g L,氯化镁5g L。最适培养温度为33℃,最适培养pH为6.0,最适培养时间为40h。关键词:解淀粉芽孢杆菌;枯草芽孢杆菌;鉴定;抑菌活性 中图分类号:Q93　　文献标识码:A　　文章编号:0001-6209(2006)01-0007-06 　　据联合国粮农组织(FAO)统计,每年因遭受植物病害引起的减产平均损失为总产量的10%～15%,其中80%以上的植物病害是由真菌引起的。目前 真菌防治主要以化学农药为主,而化学农药引起的环境污染已经对人类健康造成潜在的威胁。并且大多数引起植物病害的病原菌寄生于土壤中,一般化学农药难以从根本上控制其危害,亟待有新的、高效的微生物农药新品种或新剂型投放市场,以满足该领域的需求。堆肥中含有大量的植物病原菌拮抗菌,而且这些菌适应环境的能力较强,因而从中寻找可用作生物农药或者生物肥料的菌种成为可能。 本文从堆肥中分离到一株对尖孢镰刀菌具有强烈抗性的菌株,经鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌。该菌株营养要求较简单,环境适应能力强,有望用作生物农药或生物肥料,具有很高的开发应用前景。 [3] [2] [1] 养基(PDA),其组成为:每升含马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂15g,pH自然。Q-12菌的基础培养基为BPY培养基,其组成为:每升含葡萄糖5g,蛋白胨1g,牛肉膏5g,酵母粉5g,氯化钠5g,pH7.0。1.1.3　主要试剂和仪器:DNA凝胶回收纯化试剂盒(Ver2.0)、PCR反应用的各种试剂均购自大连TaKaRa公司;DNA提取用试剂盒购自BIO-RAD;API试剂盒(50CHB 20E)和API培养基(50CHB E)购自bioMérieux;蛋白胨、牛肉膏、NaCl、葡萄糖、阿拉伯糖等购自上海生物工程技术服务有限公司。光学显微镜(OLYMPUSBH-2)。1.2　菌种的分离纯化 从大连地区收集了200份堆肥样品,分别称取0.5g样品悬浮在4.5mL生理盐水中,剧烈振荡。将20mLPDA培养基均匀地注入一个直径为9cm的平皿中,待培养基凝固,在其正中间放置一片圆形滤纸片(Paperdisk),然后把20μL上述土壤样品悬浮液滴入圆形滤纸片中。接着在距平皿中心2.5cm处对称地接上病原菌,将平板置于28℃培养3～7d并观察抑菌圈的形成。挑选出有明显抑菌圈的平板,将生长在圆形滤纸片周围的菌落用划线法接种到营养琼脂平板上。纯菌通过反复划线接种并培养单菌落而获得。1.3　菌的鉴定 1.3.1　形态观察与染色:在光学显微镜下观察个体形态并测量菌体大小;参照文献[4]进行Gram染色、芽孢染色。 1　材料和方法 1.1　材料 1.1.1　菌种:Q-12菌株在本研究中筛选分离得到。用于筛选实验的植物病原菌尖孢镰刀菌1(Fusariumoxysporumf.sp.spinaciaeO-27),尖孢镰刀菌2(F. oxysporumf.sp.Ladicis-lycopersiciO-34),立枯丝核菌(RhizoctoniasolanikǜhnO-28)由日本广岛大学生物生产学部太田钦幸教授惠赠。用于测定抑菌谱的其它菌种由广岛大学工学部菌种保藏中心提供。1.1.2　培养基:分离筛选用培养基为马铃薯固体培 基金项目:辽宁省自然科学基金项目(2040949) 作者简介:权春善(1973-),女,黑龙江人,副教授,主要从事微生物学及分子生物学的研究。Tel:86-411Fax:86-411E-mail:m